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2011;31(4) 南方医科大学学报（J South Med Univ ） ·587 ·
·技术方法·
转基因番茄Zeneca B,Da,F 实时荧光定量PCR 检测体系的建立
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麦荣嘉 ，陈敏芳 ，莫倩珍 ，胡良勇 ，黎事伦 ，唐敏然 ，顾晓敏 ，蔡永洪 ，周伦彬 ，周晓红
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南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系，广东 广州 510515 ；广州市计量检测技术研究院，
广东 广州 510030
摘要：目的构建转基因番茄Zeneca B,Da,F 品系的质粒标准分子及其实时荧光定量PCR（qPCR）检测体系。方法 基于反
向遗传学原理构建分别含有番茄内标准基因apx检测序列（ERG-apx），转基因番茄B,Da,F 品系pg基因的基因特异性序列
（GS-pg）及其构建特异性序列（CS-16S、CS-16A）的番茄内参质粒标准分子pEasy-T3-APX ，转基因番茄B,Da,F 品系的构
建特异性质粒标准分子pEasy -T3- 16A、pEasy-T3-16S；以Beacon Designer 7.5设计用于定性PCR 和qPCR 检测的引物对
和Taqman 探针；基于质粒标准分子建立了定性PCR 和qPCR 检测体系，对方法的特异性、敏感性、重复性、检测下限等指
标进行评估；使用PicoGreen 试剂盒对质粒标准分子进行定量，以质粒pEasy-T3- APX 为背景DNA 定量混有
pEasy-T3-16A 或pEasy-T3-16S制备成含量为1%和0.1% (w/w)的两组核酸标准物质，进行所构建qPCR 检测体系的定量
性能评价。结果锚定qPCR 检测靶序列：ERG-apx 108 bp, GS-pg 108 bp ，CS-16S 109 bp、CS-16A 102 bp ；酶切鉴定所构
建的质粒标准分子均可得到预期大小的插入子片段；所建立的实时荧光定量PCR（qPCR）检测体系，重复性的相对标准差
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（RSD）0.2%~1.5% ，检测下限25 copies ，标准曲线方程线性关系R 值在0.994~0.998 ，效率在93.3%~102.4%。经换算系数
Cf 换算，对PicoGreen 定量的样品进行验证，其实测值与真值的偏差是-9.7%~17.3%。结论成功构建了转基因番茄Zene-
ca B,Da,F 品系的质粒标准分子及其qPCR 检测体系，为转基因番茄Zeneca B,Da,F 品系转基因成分的监测建立了可行的
可供使用的定性与定量检测体系。
关键词：质粒标准分子；转基因番茄；核酸检测技术；荧光定量PCR
中图分类号：Q78 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2011）04-0587-07
Construction of quantitative real-time PCR detection system of transgenic tomato line
Zeneca B,Da,F
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