HPV DNA病毒原位杂交检测方法的改进与应用.pdfVIP

维普资讯 JournalofQiqiharMedicalCollege，2004，Vo1．25，N ．1 HPVDNA病毒原位杂交检测方法的改进与应用 印永祥 陆以农 原位分子杂交与病理免疫组织化学相比有定位更准确、 衰 1 不同病理组织 HPV原位杂交结果 特异性更强 、敏感性更高、无 内源性干扰等特点，从分子生物 病理组织 HPV16／18 HPV6／11 学水平为病理诊断、鉴别诊断和预后判定提供了更可靠的指 例数 阳性 阳性率 ( )例数 阳性 阳性率 ( ) 标．从而受到广泛重视。然而此项技术又因实验步骤繁杂、技术 要求高、耗时长、影响因素多，在基层医院推广应用受到一定的限 制。为此，我们对原始操作方法加以改进，同样取得 良好效果。 1 材料与方法 3 讨论 1．1 材料 随机取我院病理诊断为尖锐湿疣 6例、宫颈癌 6 3．1 经等 比例稀释 500og／ml蛋 白酶 K液，发现浓度为 例、外阴皮肤不典型增生 1例的石蜡标本，组织均经中性福尔马 250og／ml背景清晰的消化组织片13min最佳，组织发 白，组 林液固定。人类乳头状病毒(HPV)}Ⅱyv6／l1、} Ⅵ6／18探针、显 织结构保持完整，与文献用 1og／ml蛋 白酶 K液消化组织片 色试剂盒购 自DAKO公司，采用美国Thennolyne公司变性平台。 2Orain不一致 [】]。本实验用TBS液溶解蛋 白酶 K，采用的缓 1．2 方法 一次性将德国MERCK公司的蛋 白酶 K粉剂用 冲溶液也用TBS，TBS中的氯化钠 可使背景清晰，本次实验 TBS(pH一7．6)稀释到500og／ml保存一2O℃备用。5m石 也证明了这一点。利用 DAK0笔在组织片周围划圈可减小 蜡切片，常规脱蜡、脱水；组织处理用 250og／ml的蛋 白酶 K 探针试剂消耗。阳性部位呈蓝紫色，背景清晰(如图1所示)。 消化组织片，再用几道去离子水洗去；变性和杂交时，用 DA— 3．2 HPV可引起多种人类疾病 ，其致病性与型别密切相关。 KO笔在组织片周 围划 圈，滴加探针，用清洁盖玻片盖上，放 HPV6／11主要引起生殖器疣 (称为低危型)．HPV16／18型主 在 9O℃平台上变性 6rain后 ，切片移入湿盒内置 37℃培养箱 要引起宫颈癌和上皮细胞 内瘤样病变(称为高危型)[2]。在本 杂交 6Orain．用TBS漂洗后．滴加去垢剂于 58℃培养箱中孵 研究中。HPV基因分型局限于常见的 HPV型别．即 HPV6． 育30min；杂交信号的检测．在切片上滴加碱性磷酸酶标记的 11，16。18．因而存在相当比例 的不能明确型别的HPV感染 ． 链菌素室温孵育 2Orain后．加入 BCIP／NBT室温暗处显色 称之为 HPVx感染．尚需进一步深入研究．对 HPV进行早 6Omin后，用新的去离子水冲洗；复染用 自配的核固红染 2～ 期、快速检测和型别鉴定具有重要的临床意义，本文提供的方 3min后蒸馏水冲洗．酒精脱水．二甲苯透明，中性树胶封片。 法及细节对基层医院开展 HPV检测有一定的实用意义。 每次均设 阳性、阴性对照片。 (本文 图片见封四) 2 结果 参 考 文 献 不同病理组织 HPV原位杂交结果见表 1。 [1] 病理学技术 [M]．王伯耘．北京 ：人民卫生出版社，2000：568 [2] 李过青，朱庆义．郑曙民．聚合酶反应酶谱分型检测宫颈癌中人 作者单位 t无锡市妇幼保健院病理科 乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒 [J]．中华实验和临床病毒学杂志， 邮 编 214002 收稿 日期 2004--08--04 1999，13(2)：235— 238