Lentivirus介导表达多基因的人胚基因工程神经干细胞的实验研究.pdfVIP

维普资讯 288 罔脊柱脊髓杂志2005年第 15卷第5期 ChineseJourmd inecmd却imdCord，2005，Vo1．15，No．5 Lentivirus介导表达多基因的人胚基因 工程神经干细胞的实验研究 蔡培强 ’，汤 逊 ’，林月秋 ’，OUDEGA M ，BLITSB，阳运康 ’，徐 林 ，周田华 ’ (1成都军区昆明总医院骨科 65{}032昆明市；2TheMiamiProjecttoCureParalysis，UniversityofMiamiSchoolof M edicine．Miami，FL 331()1．USA；3 Graduate SchoolforNeurosciencesAmsterdam ，NetherlandsInstitute ofrBrain Research．Amsterdam．TheNetherlands：4中国科学院昆明动物研究所 65()()()()) 【摘要】目的：探索以Lentivirus为载体 ，构建同时携带并表达多基 的基 T程人胚神经干细胞 (humanneu— ralstem cell，hNSC)的可行性，为脊髓损伤治疗的研究提供材料。方法：培养和鉴定hNSC；用携带绿色荧光蛋 白(greenfluorescenceprotein，GFP)和神经营养凶子一3(neurotrophicfactor一3，NT一3)的Lentivirus转染hNSC； 用荧光显做镜观察、鼠胚背根神经结培养(dorsalrootganglion，DRG)和 Slotblot等方法检测基因T程 hNSC的 多基因表达情况 。结果：培养获得了大量的hNSC；荧光 微镜观察到儿乎 l00％的hNSC表达 GFP；基因T程 hNSC的培养液能促使大 鼠DRG旺盛生长：Slotblot检测到基因T程 hNSC能高效分泌NT一3蛋 白。结论：以 Lentivirus为载体能构建同时携带并稳定表达多基IXl的基 T程hNSC．为脊髓损伤治疗的基础研究及进一步 临床应用提供了有价值的细胞资源 【关键词】Lentivirus；人胚神经干细胞；基因T程 ；神经营养因子一3；绿色荧光蛋白 中图分类号 ：R3I8、5 文献标识码 ：A 文章编号：l004—406X(2005)一05—0288—04 The experimentalstudy ofgenetic engineering human neuralstem cellexpressing multigene mediated by Lentivirus／CAIPeiqiang。TANG Xun，LIN Yueqiu。eta~／ChineseJournalofSpineand SpinalCord， 2005，15(5)：288～291 A【bstract】 Objective：Toexplorethefeasibilitytoconstructthegeneticengineeringhumanneuralstem cell (hNSC)whichweremediated byLentiviurstoexpressmultigene．andaffordthematerialforthefurtherstudies ofspinalcordinjury．Method：AfterthehNSCwereisolatedand identified．thehNSCweregenetielymodified byLentiviursexpressinggreen fluorescenceprotein (GFP) andneurotrophicfactor一3 (NT一3)．Thetransgenic complex expression were examined by themethodsoffluorescencemicroscope，culturingwith dorsalrootgan— glion