肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白基因片段在大肠杆菌中的表达与鉴定.pdfVIP

第 14卷第4期 湖南环境生物职业技术学院学报 Vo1．14No．4 2008年 12月 JoumalofHLmanEn、．if0nment—BiologicalPolyteehnic Dec． 2008 文章编号：】671—6361(2008)04—0048—04 肺炎嗜衣原体主要外膜蛋 白基因片段 在大肠杆菌中的表达与鉴定 周 洲， 游晓星， 胡 旃 ， 陈洪亮 (南华大学医学院病原生物学研究所，湖南衡阳421oO1) 摘 要：表达肺炎嗜衣原体(ch1amydiapneumoniae，cpn)主要外膜蛋白(M0MP)的可变区VD2一VD3区，纯 化产物并进行免疫活性分析，为探索重组蛋白在肺炎嗜衣原体血清学诊断中的应用提供资料．应用聚合酶联 反应 (PcR)技术，从肺炎嗜衣原体标准株 AR一39的M0MP上扩增出抗原优势表位 VD2一VD3区，将 目的片 段定向插入pET一3Oa载体，转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达并以Ni—NTA亲和层析柱纯化表达产物并行 westem—blot鉴定．成功构建了pET一3Oa—M0MPVD2一VD3的原核表达 系统，表达并纯化出相对分子质量 (Mr)为24×1ODa的重组蛋白．westem—blot证实重组蛋白能与cpnM0MP多克隆抗体发生特异性反应．肺 炎嗜衣原体的M0MPVD2一VD3基因可以在大肠杆菌中得到表达，其表达产物能与相应的抗体结合，为肺炎 嗜衣原体诊断候选抗原的研究奠定了基础．图4，参9． 关键词：肺炎嗜衣原体；主要外膜蛋白(MOMP)；基因表达 中图分类号：Q78 文献标识码：A 目前，血清流行病学、病理学和分子生物学等 标准”的MIF还是具有广泛应用前景的EusA， 多方面研究已证实肺炎嗜衣原体 ( f口 均很大程度依赖于抗原的制备 J．主要外膜蛋 p “nⅡe，Cpn)感染与冠心病、动脉粥样硬化、 白(Major0u￡erMembranePmtein，MOMP)是感 心肌梗死等多种疾病密切相关．尤其是它与心血 染性原体表面的主要膜蛋 白携带多种抗原决定 管疾病 的关系，已成为各国学者关注的焦点之一． 簇 ，是诊断试剂和疫苗开发的基础．本研究选择 据统计，全球 20岁以上的成人几乎都受到过该病 CpnompA (MOMP基因)的一段基因片段作为研 原体的感染，其在人群中的血清抗体阳性率可达 究对象，利用基因工程的方法将该基因定向克隆 5O～70％ ’．由于病原不明、临床症状不明显， 到原核表达载体pE 0a中，并将重组质粒转化 大部分感染者未及时采取治疗措施或使用有效的 宿主菌BL21，实现 目的蛋 白的融合表达，并以亲 抗感染药物而导致病情延误．Cpn在体 内持续存 和层析柱纯化了表达产物，为 Cpn进一步的研究 在 ，感染反复迁延，造成人体多系统、多器官的慢 工作奠定了基础． 性病理损害，从而成为冠心病、动脉粥样硬化、心 1 材料与方法 肌梗塞等疾病发生发展的相关病因 ．因此，有 必要建立一种简单、高效、快速的诊断方法． 1．1 主要试剂 由于Cpn感染者多数情况下缺乏典型的临 Ni—NTA亲和层析柱购 自QIAGEN公司； 床表现，诊断主要依靠实验室检查．相较而言，血 BcA蛋白浓度检测试剂盒购 自碧云天；Pfu—Taq 清学实验具有方便快捷、灵敏度高的特点，是 Cpn 高保真 PcR试剂盒为大连 TaKaRa公司产品； 感染的常规检测方法 ’．但是，不论被誉为 “金 BamHI、HindⅢ内切酶、DNA分子量标准、蛋 白 收稿 日期 ：2008—1l—l2 基金项 目：湖 幸『J省 生厅重点课题资助项