针刺对局灶性脑缺血大鼠海马神经元细胞[Ca~（2＋）]_i的影响.pdfVIP

天 津 中 医 药 2012年4月第29卷第2期 140 TianjinJournalofTraditionalChineseMedicine Apr．2012。Vo1．29No．2 · 针灸与推拿 · 针刺对局灶陛脑缺血大鼠海马 神经元细胞 【Ca 】的影响冰 杨 沙，沈 燕 ，孙云浩，王 舒 (天津中医药大学第一附属医院针灸研究所，国家中医药管理局脑病针刺疗法重点研究室 天津市针灸学重点实验室，天津 300193) 摘要：【目的】研究脑缺血不同时点大鼠海马神经元内游离 Ca浓度[Ca“]及醒脑开窍针刺对其影响，探讨醒脑 开窍针刺法早期干预对脑缺血的治疗作用。方【法】建立大脑中动脉所致局灶性脑缺血(McA0)模型，采用醒脑开窍 针刺法治疗，采用激光扫描共聚焦显微技术动态观察脑组织海马CAI区锥体细胞 fca1_在不同时间点的变化。 [结果】与正常组大鼠相比，模型组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞内游离[Ca“】；(以细胞内ca相对荧光强度表示) 在局灶性脑缺血 1h时升高，持续升高至缺血24h时 (PO．05)。假手术组与正常组相比，Icaz+]；变化差异无统计学意 义(Jp0．05)。相应时间点非穴位针刺组与模型组 c【az+]i比较，无统计学意义(尸0．05)。在相应时间点，醒脑开窍针刺组 c【az+】{低于模型组(P0．叭)。结【论】急性局灶性脑缺血后大鼠海马神经细胞[ca2+1随缺血时间的延长而持续升高，提 示细胞内钙超载；醒脑开窍针刺组能有效调节缺血区的fca2+]。，提示在缺血后针刺治疗效果越早越好，为临床及早应 用针刺治疗缺血性脑血管病提供了理论依据。 关键词：“醒脑开窍”针刺法；局灶性脑缺血；海马CA1神经细胞；[Ca ；钙超载；激光扫描共聚焦显微镜 中图分类号：R246 文献标识码：A 文章编号：1672—1519(2012)02-0140-05 脑血管病是神经科的常见病和多发病，是 目前 Hochest33258(Sigma公司，美国)，Ca荧光助染剂 人类疾病三大死亡原因之一，并且是最主要的致残 PluronicF一127(Biotiuln公司，美 国)。 原因。神经元内Caz+超载是缺血性脑损伤的关键因 1．1．2 实验动物 选择健康雄性SD大鼠(Ⅱ级)，体 素 11『。“醒脑开窍”针刺法治疗脑血管病应用30多年 质量200．--250g，由北京大学医学实验动物中心提供。 来取得了显著I临床疗效。基础研究发现，醒脑开窍 1．2 方法 法可促进局灶性脑缺血 (MCAO)大鼠缺血侧大脑 1．2．1 分组 70只造模成功的SD大鼠，按随机数 循环的建立I21，其机制通过调节血管内皮生长因子 字表法随机分为正常对照组 ，假手术组 5只，模型 (VECF)／Flt一1、血管紧张素(Ang)／Tie一2的表达3[1，还 组、非穴位针刺组、传统针刺组、醒脑开窍针刺组各 有研究发现醒脑开窍法可通过泛素蛋 白酶体通路 15只，后 4组分设缺血 1、6、24h组 ，共计 3个观 起脑保护作用 ，本实验选择线栓法制作大脑中动 察时点。 脉阻塞的MCAO大鼠模型，利用激光共聚焦扫描显 1．2．2 模型制作 参照Longat~等人报道的线栓法， 微镜 (LSCM)技术，观察海马CA1区活体脑片上针 阻断大鼠一侧的大脑中动脉造成MCAO模型。正常 刺对缺血后细胞内的Caz+含量影响，进一步探讨醒 对照组不进行手术处理。 脑开窍针刺法对脑缺血保护的作用机制。 1．2．3 针刺方法 根据中国针灸学会实验针灸研 1 材料与方法 究会制定的 “动物针灸穴位图谱”，醒脑开窍针刺组 1．1