desmoplakin基因在斑马鱼早期胚胎表达的研究.pdfVIP

四川动物2010年第29卷 第6期 SichuanJournalofZoology Vo1．29 No．6 2010 desmoplakin基因在斑马鱼早期胚胎表达的研究 肖春，刘境 ，胡火珍 (四川大学生命科学学院，成都610064) 摘要：斑马鱼是现今研究脊椎动物发育的重要模式动物。目前桥粒斑蛋白(desmoplakin，DSP)的时空表达模式 还没有详尽的描述，为了研究桥粒斑蛋白在发育过程中的时空表达，我们从斑马鱼胚胎提取了总RNA，制备eDNA， 并以其为模板克隆得到desmoplakin基因。利用整体原位杂交技术研究了该基因在斑马鱼胚胎的时空表达图谱。 结果显示，该基因在胚层分化前没有表达 ，在胚盾期后主要在表皮、耳和原肾管表达，并暗示DSP在这些器官发育 过程中发挥重要作用。 关键词：斑马鱼；桥粒斑蛋 白；时空表达图谱 中图分类号：Q343 文献标识码 ：A 文章编号：1000—7083(2010)06—0965—03 SpatiotemporalExpressionPatternResearchofDesmoplakinin theEarlyEmbryosofZebrafish xIA0 Chun．LIU Xiao．HU HUO．zhen (CollegeofLifeSciences，SichuanUniversity，Chengdu610041，China) Abstract：Zebrafishisanimportantanimalmodelforresearchingthedevelopmentofvertebrates．Spatiotemporalexpres— sionofdesmoplakin(DSP)waspreviouslyunknownduringzebrafishembryogenesis．TotalRNAwasextractedrfomtheze— brafishembryos．ThecDNAwasobtainedbyreversetranscriptionfrom thetotalRNA．Expressionpattern researchinthe earlyembryosofthezebr~shrelatedtodesmoplakinrfom thecDNA wasca~iedout．Theresultsofwholemountinsituhy— bridizationshowedthatitwasnotdetectableuntiltheshieldstageandthatstrongpositivesignalsweredetectedintheepi— dex~nis，earsandpronephricduct．TheresultsimplythatDSP isinvolvedinzebrafishepidermis，earandpronephricduct development． Keywords：zebrafish；desmoplakin；spatiotemporalexpressionpatterns 斑马鱼是 目前发育生物学研究中广泛使用的一 马鱼胚胎，利用注射器破碎胚胎，提取总 RNA，反转 种模式生物，属于脊椎动物。斑马鱼具有易繁殖，发 录获得 cDNA。根据 GenBank所提供斑马鱼 desmo— 育周期较短，胚胎在早期透明易观察等特点，为利用 plakina的mRNA序列 (GenBank：BC090682．1)设 分子生物学手段研究斑马鱼的基因表达 ，揭示斑马 计特异引物，以所获得的24h胚胎的cDNA为模板 鱼发育的分子机理奠定了很好的基础。对斑马鱼的 通过PCR扩增出所需片段，将其连接于T．easy载体 发育研究为高等哺乳动物发育机理的探索提供了重 上作为原位杂交探针的模板。此段 mRNA翻译出