利用爪蟾卵母细胞建立人类低密度脂蛋白受体基因表达系统.pdfVIP

维普资讯 l38 ISSN lOO7．3949ChinJArterioscler，Vol13，No2 · 实验研究 · [文章编号]1007．3949(2005)13．02-0138—05 利用爪蟾卵母细胞建立人类低密度脂蛋白受体基因表达系统 沃兴德 ，范春雷 ，罗 艳 ，钱 颖 ，卢德赵 ，唐利华 (1．浙江中医学院生命科学系，浙江省杭州市310053；2．杭州师范学院生物化学教研室，浙江省杭州市 310008) [关键词] 细胞生物学；低密度脂蛋白受体基因表达系统； 细胞核显微注射； 爪蟾卵母细胞； 低密度脂蛋 白； 动脉粥样硬化 ； 质粒构建 [摘 要] 目的 在爪蟾卵母细胞中建立人类低密度脂蛋白受体基因的表达系统，此系统可被用于降血脂和抗动 脉粥样硬化的研究。方法和结果 冰块麻醉爪蟾 ，切取卵巢，获得 v、Ⅵ期卵母细胞 ，经用 1g，L胶原酶孵育过夜除 去卵母细胞外层的卵巢膜和滤泡膜，培养3天后存活率仍可达95％以上。用DiI标记的低密度脂蛋 白荧光配体测 定膜上结合荧光，发现V、VI期卵母细胞膜上未见有 内源性低密度脂蛋白受体，如将人低密度脂蛋 白受体的表达质 粒 D3．7低密度脂蛋白导入爪蟾卵母细胞核中，培养后用DiI标记的低密度脂蛋 白配体测定可见膜上发出红色荧 光，用抗低密度脂蛋白受体的抗体经免疫荧光检测法测定可见膜上有绿 色荧光，免疫胶体金标记透射 电镜检测可 见膜上有 内吞的胶体金颗粒。结论 外源性的人类低密度脂蛋 白受体基因能在爪蟾 v、Ⅵ期卵母细胞 中表达，此 低密度脂蛋 白受体基因表达系统可用于中药降血脂抗动脉粥样硬化机理的研究。 [中图分类号] Q2 [文献标识码] A EstablishingtheExpressiveSystem ofHumanLowDensityLipoproteinReceptorGenein theOocyteoftheXenopusLaevis WOXing-De。FANChun-Lei。LU0Y 。QtANY 。LUDe-Zhao。andTAN GLi—Hua (1．MolecularMediccd]n~tittaeof Trad／t／ond e胍 Cott~e， 嘲如u310053；2．DE ofBi~tanistryofHangzhou Teacher’5CoUpe，HangAwu310008；Chn／a) K【EYWORDS] Oocyte0fXenopusLaevis； LowDensityLipoprotein； Atheroscleresis； PlasmidConstruction； LDL ReceptorGene； Lowering-Lipids 【B AlCT] Aim nIeexpressivesystemoflowdensi~lipoprotein(LDL)receptorgenewasestablishedintheoocyteof hteXenopuslaevisnadhtesystem isapplide toinvestigationoflowering—lipidsnadnati—ahteriosclerosis． M ethods nlefluo— nscenceonhtemembranewiht DiI-LDLweredeterminde byculturinghteoocytesinhteperiodVnadVISOastoiudgewhehter hteendogenousLDLreceptorinoocyteofxenopuslaevisexistde． Afterhtenhtep3．7LDL(naexpressionplasmidwhichcontain humna LJ)Lreceptorgene)wastransmittohtenucleusofooeyteandhteimmunofluorescene