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维普资讯 http:// 《生命的化学 年 卷 期 ●小综述 , 文章编号:? ??具有转糖基活性的糖苷酶的分子进化 卢丽丽 肖 敏 赵 晗 山东大学微生物技术国家重点实验室,济南 摘要:糖苷酶是糖类合成的重要催化剂,但其催化的反应为可逆反应,产物产量不高。近年来,通过糖苷酶催 化位点氨基酸突变、其他位点氨基酸突变、随机突变、 端缺失突变和混编 等方法对糖苷 酶进行分子进化.使得糖苷酶合成糖类的产量大幅度提高.同时也优化了糖苷酶催化糖类合成时的其他性质, 如区域选择性和温度耐受性等 关键词:糖苷酶: 分子进化 中图分类号: ,, 糖苷酶 .. .根据催化作用机 碱制的不同分为构型翻转酶和构型保持酶.其中. 构型保持酶在催化糖苷键水解的同时.还具有转 一 、 ,一 糖基活性.即糖苷键合成活性,其催化位点的一对氨基酸一般为谷氨酸或天冬氨酸在反应中分 ? 亲核体 ? 别起酸碱催化和亲核体催化作用。以 一糖苷酶为 图 糖苷酶催化糖类合成的机制 例,反应第一步,亲核体进攻 一糖苷底物,形成 /一糖基一酶中间物.酸催化为底物离去基团的离 去提供质子帮助.促进解离:反应第二步,碱催 性和一定的区域选择性.反应途径简单.底物价 格便宜.且酶较易获得.性质稳定,因而在大规 化激活受体分子.促使共价中间物的糖基与酶发 生解离.这时如果受体分子为糖苷.将发生转糖 模合成糖类方面优于其他方式如化学法和糖基转 移酶法合成。但糖苷酶所催化的反应处于水解与 基反应形成 一糖苷产物图”。 / 糖苷酶催化的糖类合成具有严格的立体选择 合成的动态平衡状态.转糖基产物也可以作为底 物被酶重新水解.产量一般较低.通过优化反应 收稿日期:? ? 条件.也只能在一定程度上促使反应平衡向糖苷 国家自然科学基金资助项目 . 、国家 “十五”攻 键合成的方向进行.不能改变酶催化可逆反应的 关计划项目 .?本质.产物产量只能在一定范围内提高。另一方 作者简介:卢丽丽 一 ,女,博士生, ?: ? 面.糖苷酶并不具有严格的区域选择性.导致产 . . . ;肖 ,女,博士,教授,博士生 物中存在异构体.分离有一定难度。近年来,科 导师,联系作者, ? :. . ;赵 晗 一 女,博士生, ? :. .. 学家采用各种分子生物学手段对糖苷酶进行分子 ., , :酒酵母尤其是各种病原真菌中 . 一葡聚糖合酶 . ,, : 基因及其调控机制的研究必将极大的促进新型抗 . , , : ? 真菌药物的研制和发展。 ’. ,, : ? . ,, :?参 考 文 献】 . , , : . , , : ??/., , : . , , : .,,: ? . , ,: ., , : 叶丽娟等.国外医药抗生素分册,,: ?. ,, : 维普资讯 http:// 《生命的化学 年 卷 期 ● , 进化.从而大幅度提高糖苷酶的转糖基效率.优 物合成 , 一硫代糖苷,产量为 %~ %。化糖苷酶的区域选择性.改善糖苷酶的酶学性质 天然酶不能进行该反应.可能是由于硫原子的空 等 本文介绍具有转糖基活性的糖苷酶分子进化 间阻碍较大。 年,等【 将酸碱功能 的研究现状 氨基酸和亲核体氨基酸同时突变去除.形成第一 .催化位点氨基酸的定点突变 个硫代糖苷合成酶 / .以【一氟 糖苷酶催化位点氨基酸的突变产生了三类催 代糖和 一糖为底物合成 一 。 一硫代糖苷,产 化剂:第一类是糖苷合成酶 ,其亲 量为 %~ % 目前已经报道了 多种糖苷合 核体氨基酸发生突变,使得 一糖苷不能作为 一 成酶... 种硫代糖苷酶 和 种硫代糖苷合 糖苷酶的底物,只有【一氟代糖能作为底物.遵循 成酶,分别来源于【一葡糖苷酶、一木糖苷酶、 单置换机制,形成 一糖苷产物,突变酶因缺少亲 一葡糖苷酶、 一甘露糖苷酶、 一半乳糖苷酶、 核体氨基酸.不能催化产物水解.产量大幅度提 一葡聚糖苷酶、 一甘露聚糖苷酶、 一木聚糖苷 高;第二类是硫代糖苷酶 ,其酸碱 酶和神经节苷脂内切糖苷酶 这些工具酶合成的 功能氨基酸发生突变.使酶失去了碱激活作用. 寡糖产量一般为 %~ % .催化位点以外氨基酸的定点突变 需要亲核性更强的巯基糖作为糖基受体.受体分 子中巯基的位置决定反应的区域选择性:最后一 糖苷酶的氨基酸组成中.活性中心一些氨基 类是亲核体和酸碱功能氨基酸同时突变去除形成 酸与转糖基活性有着密切联系 例如,芳香族氨 的硫代糖苷合成酶。同时需要 基酸如苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸通过非极性叠 一 氟代糖和巯基受体图 。前两种突变酶由于 加作用稳定酶与寡糖底物的结合,并且通过该底 催化位点的取代氨基酸不同.催化糖类合成的效 物与水