60株鲍曼不动杆菌喹诺酮类耐药基因分析.pdfVIP

山东医药2011年第51卷第3期 6O株鲍曼不动杆菌喹诺酮类耐药 基因分析 曹 阳。马全玲，魏殿军 。赵 猛 (天津医科大学第二医院，天津300211) 摘要：目的 探究鲍曼不动杆菌喹诺酮类耐药的机制。方法 收集2009年 1一l2月天津市三所三甲医院各类 标本分离的鲍曼不动杆菌6o株。采用聚合酶链反应(PCR)扩增技术对质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、 qnrS、acc(6)．Ib．cr、qepA及染色体基因gyrA和parC进行基因检测，并对阳性结果进行酶切和测序鉴定。结果 6o 株鲍曼不动杆菌中qmA、qnrB、qmS和qepA基因均为阴性 ，acc(6)．Ib基因12株阳性，经测序证实均未出现变异o 37株环丙沙星耐药的鲍曼不动杆菌中3O株 (81．O％)gyrA基因不被 HidI酶切 ，26株 (7O％)parc基 因不被 HiTlfI 酶切，证实有基因突变存在。结论 天津地区尚未发现鲍曼不动杆菌中存在质粒介导的喹诺酮耐药机制，gyrA和 parC基因变异仍为鲍曼不动杆菌喹诺酮耐药的主要原因，但同时亦有其他喹诺酮耐药机制的存在。 关键词：鲍曼不动杆菌；质粒 ；喹诺酮类耐药基因 中图分类号：R969．3 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2011)15-0070-03 近年来，多重耐药鲍曼不动杆菌引起感染的报 噻肟、头孢哌酮／舒巴坦、庆大霉素、头孢西丁、复方 道明显增多，由于该菌对常用抗菌药物耐药严重，临 新诺明、亚胺培南、氯霉素、氨曲南、左氧氟沙星、美 床治疗棘手，因此常造成医院内感染的暴发流行。 罗培南。判定标准参考CLSI2009版规定。 以往认为造成细菌喹诺酮耐药的机制主要是靶位基 1．3 喹诺酮类耐药基因检测 因的变异、外膜孔蛋白通透性下降和外排泵的作用， 1．3．1 模板 DNA提取 采取煮沸法。将临床分离 以上机制均由染色体所介导。近年来，质粒介导的 鉴定的鲍曼不动杆菌接种到含有5IIllLB液体培养 喹诺酮类耐药机制引起国内外学者广泛关注 -2J， 基的试管中，37℃震荡培养 16—18h，6000r／min 但关于质粒介导的喹诺酮类耐药基因的发现几乎均 离心10rain，弃去上清，沉淀用2O 双蒸水涡旋混 存在于肠杆菌科细菌中，而在非发酵菌中质粒介导 匀，95℃煮沸 10rain，冰浴5min，4oC12000r／rain 的耐喹诺酮基因仅有个别报道 】。近期我们对天 离心 10min，取上清与等量的氯仿 (约200 )混 津地区2009年鲍曼不动杆菌喹诺酮类耐药基因情 匀，4℃ 12000r／min离心2rain，小心吸取上清，上 况进行了分析，旨在探究鲍曼不动杆菌喹诺酮类耐 清即为用于PCR扩增的模板，放于 一20℃保存备 药的机制。 用。 1 材料与方法 1．3．2 qnrA、qnrB、qnrS、qepA、acc(6)一Ib、gyrA和 1．1 材料 2009年 1～12月天津三所三级甲等医 parC基因扩增 ①引物设计：参照文献 ，PCR 院各类临床标本，包括痰、血液、伤口分泌物等中分 产物的大小分别为580、617、427、509、548、343、327 离的非重复鲍曼不动杆菌6O株。质控菌株为大肠 bp。②PcR反应体系：总体积 25 l。其中premix 埃希菌 ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853。 Taq酶 12．5 ，上下游引物各 1 ，DNA模板3 ， 质粒介导喹诺酮类耐药基因 qnrA、qnrB、qnrS、ace 去离子水7．5 l。试剂购 自宝生物工程有限公司。 qnrA、qnrB、qneS、qepA、ace(6)一Ib基因PCR循环参 (6)一Ib—cr、qepA阳性对照株由上海华山医院抗生