EGF对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响及意义.pdfVIP

山东医药 2011年第 51卷第 26期 · 临床研 究 · EGF对脑胶质瘤 U251细胞增殖的 影响及意义 董 超 ，黄 威 ，刘 辉。，任今今 (1河北大学医学部，河北保定071000；2河北大学图书馆 ； 3河北大学预防与卫生管理系) 摘要：目的 探讨表皮生长因子(EGF)对人脑胶质瘤细胞 U251增殖的影响。方法 分别用 1O、50、100、200 ng／ml的EGF作用于U251(实验组)，以不加EGF的细胞为对照组。采用倒置显微镜观察细胞形态学改变，MIT法 检测U251细胞增殖活力 ，细胞免疫组化染色法检测U251中Ki-67。结果 与对照组比较，实验组贴壁瘤细胞数量 明显增加，排列密集。随着EGF浓度提高，U251的增值能力增加，呈剂量依赖性(P0．05)，以100nreml的EGF 促细胞增殖能力最强 ；200ng／IIll的EGF对U251细胞促增殖作用减弱。在 100ng／ml的EGF作用下，U251中l(i一 67的表达较对照组明显升高(P0．05)。结论 一定浓度的EGF可以促进U251增殖 ；EGF可以双向调节 13251 细胞的生物学活性，在细胞信号传导通路中发挥重要作用。 关键词：神经胶质瘤；表皮生长因子；Ki-67；细胞增殖 中图分类号：R739．41 文献标志码 ：B 文章编号：1002-266X(2011)26-0043-02 脑胶质瘤是颅 内最常见的肿瘤 ，表皮生长因子 度为 1×10，接种于96孔板上，每孑L180 l，设空 白 受体(EGFR)信号传导通路参与调节大多数肿瘤的 对照孔。分别加入 l0、50、100、200ng／ml的EGF 发生、发展过程。EGF是 EGFR的配体，EGF对胶 作用24h(实验组)，以不加 EGF的细胞为对照组。 质瘤的影响机制并不十分清楚。2010年6～8月， 各设5个复孔，37oC、5％CO、饱和湿度的条件下培 我们观察不同浓度的EGF对人脑胶质瘤细胞 U251 养。 增值能力的影响，探讨EGF在细胞信号传导通路中 1．3 观测指标及方法 ①U251形态：采用倒置显 的作用。 微镜观察。②细胞增殖力：采用 MTT法检测 U251 1 材料与方法 细胞增殖力。酶标仪设570nln为检测波长，测各孔 1．1 细胞及主要试剂 胶质瘤细胞株 U251为本 的吸光度值(A值)。③U251中Ki-67：取对数生长 校实验室冻存。EGF(Sigma公司)溶解于二甲基亚 期细胞滴加在多聚赖氨酸处理的无菌载玻片上，细 砜(DMS0)中配制成 1000ng／ml母液，分装后 胞爬满载玻片后经冷丙酮固定 15min，采用免疫组 一 织化SP法检测细胞中Ki-67。以细胞核呈棕黄或棕 86℃保存。实验前用新鲜 DMEM(Gibco公司) 培养液按比例稀释至终浓度，冰上避光操作。Mqq 褐色为阳性细胞，在高倍镜 (400×)下随机选取 l0 个视野，以阳性染色的细胞数与所测细胞数的比为 (Sigma公司)，鼠抗人Ki-67单克隆抗体及免疫组化 增殖指数 (PI) 。 其他试剂 (福州迈新生物有限公司)。 1．4 统计学方法 采用 SPSS13．0统计软件 。计量 1．2 细胞培养及分组 U251用含 10％小牛血清 资料用 土s表示，采用方差分析，计数资料用 检 的DMEM高糖培养基，37qC、5％CO孵箱培养，培 验 。 =0．05。 养液加 1％双抗 (青霉素、链霉素)，0．25％胰酶消