GDF5基因启动子表达载体的构建.pdfVIP

山东医药2011年第 51卷第26期 GDF5基因启动子表达载体的构建 蒋 旭，孙立胜 。史冬泉，蒋 青 ’ (南京大学医学院附属鼓楼医院，南京210008) 摘要：目的 构建含人生长分化因子5(GDF5)基因启动子表达载体pGl_3-GDF5，为研究GDF5在骨骼、肌肉发 育的作用机制提供实验基础。方法 扩增人GDF5基因启动子序列，克隆至pGl_3一Basic表达载体并转化人大肠杆 菌 DH10b，双酶切鉴定并测序。结果 PCR扩增后的产物在约854bp处出现明显的特异性条带，酶切鉴定结果与 理论预测值一致 ，测序未出现碱基突变。结论 成功构建了含GDF5基因启动子的表达载体。 关键词：生长分化因子5；pGI．3-Basic载体；质粒 中图分类号：R318 文献标志码：A 文章编号：1002-266X(2011)26-0017-03 ConstructionandexpressionofvectordrivenbVGDF5promoter JIANGXu，SUN 一sheng，SHIDong—quan，JIANGQing (NanjingDrumTowerHospitaltheAffiliatedtoMedicalSchoolofNanjingUnivers ， Nanfing210008，P．R．China) Abstract：Objective Toconstructtheexpressionvectorcontaininggrowthdifferentiationfactor5(GDF5)promoter pGL3一GDF5，providingexperimentalbasisforthestudyingofGDF5inthemechanism ofdevelopmentof boneandmuscle． M ethods GDF5Was amplifiedwiththehumangenomeDNA byPCR，thesegmentwasclonedintothepGI3一Basicvector andtransformedintoE．Coli，whichWas detcetedbyendonucleaseandsequencde．Results ThePCR ma plifiedproducts appearedspecificbandat854bpsite．Thesequencedsegment(854bp)inhterecombinnatsWasidenticaltothatGenBank hadreportednadthe semg entwasinsertedinrightdirection．Conclusion Th eexpressionvcetorpGL3一GDF5isSUCCESS— fullyconstructed． Keywords：growthdifferentiationfactor5；pGL3一Basicvcetor；plasmid 生长分化因子5(GDF5)，又称软骨来源形成蛋 英骏生物技术有限公司合成)，5端分别加人BglII、 白1，属骨形态发生蛋 白(BMP)家族 ，也是转化生长 Hind11I酶切位点。上游引物序列：5-GAAGATCTCT 因子 p(TGF—p)超家族成员之一_1J，是骨骼系统的 GGAAAGGArrCAAAAcTAGGG-3，下游引物序列： 主要调节因子 ，在骨骼发育过程中对软骨内成骨，骨 5一CCCAAGCTrGGGGACAGATCCTGCTI~一3 。 与关节的形成起着重要作用L2。2010年 1～12月， 1．2．2 基因组 DNA提取 用基因组 DNA抽提试 我们采用 PCR技术成功构建含 GDF5基因表达载 剂盒提取健康人外周血基因组DNA，作为PCR扩增 体pGL3一GDF5。现报告如下。 模板。 1 材料与方法 1．2．3 PCR扩增 PCR反应体系50 I，反应参数： 1．1 主要试剂 载体pGL3一Basic，大肠杆菌 DH10b 94c=【预变性3min后，94℃变性30S，55oC退火30 感受态细胞 (南京大学模