HPLC法同时测定发酵液中纽莫康定Ao与Bo的含量.pdfVIP

2o11，Vo1．28No．8亿 亏 与生 物 Z程 Chemistry Bioengineering doi：10．3969／j．issn．1672—5425．201I．08．024 HPLC法同时测定发酵液中纽莫康定 Ao与Bo的含量 张雪霞，李 宁，李晓露 ，林 日i5，张金娟 ，林 毅 ，蒋 沁 (微生物药物 国家工程研究中心，河北省工业微生物代谢工程技术研 究中心 ， 华北制药集团新药研 究开发有限责任公司，河北 石家庄 050015) 摘 要 ：采用 HPLC方法同时测定发酵液 中纽莫康定 A。与 的含量 。色谱柱为 SepaxSapphireC8(4．6mmX250 mm，5“m)，流动相为甲醇一水(体积 比45：55，内含 0．1‰三氟乙酸)，流速为 1．OmL ·rain_。，紫外检测波长为 214 rim。结果表 明，纽莫康定 A。与 B0的浓度分别在 47．5～191．4 g·mL 和 38．4～153．6 g ·mL-1的范围内，与峰面 积呈良好的线性关系(R分别为 0．9997和 0．9998)；检测灵敏度分别为 6．86ng、5．95ng；平均回收率分别为 99．15 (RSD一0．96 ，n一9)和 99．31％(RSD=0．98 ，n一9)。该方 法 简便 、准确 、重现性好 ，可用于发酵液 中纽莫康 定 A。与 B0含量的测定 。 关键词 ：高效液相 色谱法 ；纽莫康定 A。；纽莫康定 Bo 中图分类号：O657．72 文献标识码 ：A 文章编号：1672—5425(2011)08--0088—03 天然产物纽莫康定 (Pneumocandins)是一类新型 Merck公司；提取用 甲醇 ，分析纯；去离子水 ，自制。 环脂肽类抗真菌化合物 ，具有环状六肽母核和脂肪酸 高效液相色谱仪 (515泵 ，996检测器)，Waters公 侧链结构 ¨1]，将其 中的纽莫康定 A。和纽莫康定 的 司 。 脂肪酸侧链脱掉后的环状六肽母核分别是合成米卡芬 1．2 对照品溶液的配制 净 (Micafungin)和卡泊芬净 (Caspofungin)的主要原 精密称取纽莫康定 A。对照品2O．0mg、Bo对照 料_2【]。米卡芬净和卡泊芬净是一类全新的棘 白菌素 品 16．0mg，置于 100mL容量瓶 中，用 甲醇溶解后定 (Echinocandins)类抗真菌药，对大多数念珠菌 (包括 容 ，摇匀 ，得混合对照品贮备液 。精密量取贮备液 5 一 些对唑类耐药的菌株)具有快速的杀灭作用 、对大多 mL置于 10mL容量瓶中，用甲醇稀释 ，定容 ，摇匀 ，得 数 曲霉有抑制作用 ]。 混合对照品溶液。 纽莫康定的发酵液中含有纽莫康定 A。与纽莫康 1．3 供试 品溶液的制备 定 B0，同时测定纽莫康定 A。与 B0含量的方法 尚未见 量取 5OmL纽莫康定发酵液，过滤，得菌丝滤饼 ， 报道。作者在此采用 HPLC法 同时测定发酵液 中纽 向菌丝滤饼中加入 甲醇 200mL，超声提取 30rain，过 莫康定 A。与 B。的含量 ，对检测条件进行 了考察 ，为 滤，重复提取 2次，合并滤液，混合均匀，用 0．22 m 同时测定发酵液 中纽莫康定 A。与 B0的含量提供 了 的膜滤过 ，得供试品溶液。 一 条有效途径 。 1．4 色谱条件 1 实验 色谱柱为 SepaxSapphireC18(4．6mm×250Iil