二硝基苯肼柱前衍生高效液相色谱法测定D-.pdfVIP

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2017-09-12 发布于重庆
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第 40 卷分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究第期 2012 年月 Chinese Journal of Analytical Chemistry ~ : / DOI 10.3724SP.J.1096.2012.20447 ,二硝基苯肼柱前衍生高效液相色谱法测定 24- 脱氧木酮糖磷酸合酶稳态动力学参数 1- -D- -5- 胡玥王雪娇李恒高文运* ( , ) 西北大学生命科学学院西安 710069 摘要利用含羰基化合物与 2,4 二硝基苯肼在酸性条件下反应得到的产物腙对紫外可见光有吸收的特 - - , 。性采用柱前衍生高效液相色谱法测定了 1 脱氧木酮糖 5 磷酸合酶稳态动力学参数酶反应产物 1 脱氧 - -D- -- - - , 木酮糖 5 磷酸在碱性磷酸酶的作用下生成去磷酸化产物 1 脱氧木酮糖然后与 2,4 二硝基苯肼衍生成 D- -- - -D- - 。 : , , , 腙衍生化反应的适宜条件为 HClO4 浓度为 1.5% 反应温度 37 反应时间 60 min 2,4 二硝基苯肼与 1 脱 ℃ - - 。 : , ; , 。氧木酮糖 5 磷酸的摩尔比为 6 1 色谱条件 0 17 min 40% 80% 甲醇 18 20 min 40% 甲醇结果表 -D- -- ∶ ~ ~ ~ , , , 明本方法具有较高的灵敏度和良好的线性关系 1 脱氧木酮糖 5 磷酸的检出限为 1.0 mg/L 在 0.005 - -D- -- ~ , ( ), 。 1.0 g/L 范围内线性相关系数为 0.999 相对标准偏差小于 5.0% n=3 标准回收率为 102.22% 用本方法测得的 1 脱氧木酮糖 5 磷酸合酶稳态动力学参数 m 、max 和 cat 与文献报道一致。 - -D- --