斑马鱼Foxp4基因多克隆抗体的制备及检测.pdfVIP

第20卷第 4期 激 光 生 物 学 报 VD1．2ONo．4 2011年 8月 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Aug．2011 dot：10．3969／j．issn．1007-7146．2011．04．024 斑马鱼 Foxp4基 因多克隆抗体的制备及检测 刘华友，朱 玲，李 帆，王 琨，江志钢 ，吴秀山 ，李永青 (湖南师范大学蛋 白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，湖南 长沙410081) 摘 要 ：roxp4为Fox基因家族的一员，目前研究发现其与肺、肠、心脏以及中枢神经系统的发育有关。为了在 斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能 ，有必要制备其多克隆抗体。按照巢式PCR原理，经过两次PCR扩增出 亲水性和特异性均好的斑马鱼 基因片段，将其克隆人表达载体pGEX4T一1，转化至大肠杆菌BL21中，再通 过 IPTG进行诱导表达 GST—Foxp4融合蛋白。融合蛋白先经谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化，再经切胶纯化回收，然 后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，分别进行 Western—blot实验检测抗体效价和特异性。所得结果显示获得 了较高效价和特异性好的斑马鱼Foxp4多克隆抗体，为 Fo~p4功能的进一步研究奠定了基础。 关键词 ：Foxp4；原核表达；多克隆抗体 中图分类号：Q812 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007-7146(2011)04-0556-04 Preparation andDetectionofPolyclonalAntibodyofFoxp4 GeneinZebrafish L／UHuayou，ZHULing，LIFan，WANGKun，JIANGZhigang， Xiushan ，LIYongqing (TheCenterforHeartDevelopment，KeyLabofMOEofrDevelopmentBiologyand ProteinChemistry，HunanNormalUniversity，Changsha410081，Hunan，China) Abstract：AsamemberofFoxgenefamily，Fo~p4hasbeeninvolvedinthedevelopmentoflung，intestine，heart，and tl1eeentralnervoussystem bythecurrentresearch．InordertostudythefurtherfunctionofFo ~p4geneinZebrafishmod— el，itisnecessary toprepareitspolyclonalantibody．AccordingtotheprincipleofnestedPCR，thehydmphilicandwell specificfragmentofZebrafishFoxp4wasobtainedaftertwicePCRamplifications，then itwasclonedintotheexpression vectorpGEX4T一1andtransformedintoEscherichiacoltBI21．TheBL21strain，containingFoxp4recombinantplasmid， wasinducedwithIPTGtoacquireGST—Foxp4fusionprotein．TheinducedproteinwaspurifiedbyGlutahtioneSepharose andgelcuttingextraction，thenitwasimmunedintotheNewZealandwhiterabbit．Theantibody’Stiterandspecification wasidentifiedbyWesternblotse