DNA改组及其在HPV治疗性疫苗研制中的应用.pdfVIP

第 30卷第 3期 河 北 医 科 大 学 学 报 Vo1．3O No．3 2009年 3月 JOuRNAL 0FHEBEIM EDICALUNIVERSITY Mar． 2009 ·315 · · 综 述 · DNA改组及其在 HPV治疗性疫苗研制中的应用 张佃财 (综述)，李艳佳 (审校) (河北医科大学第一医院皮肤性病科 ，河北 石家庄 050031) 【关键词】 DNA改组 ；乳头状瘤病毒 ，人 ；综述文献 doi：10．3969／j．issn．1007—3205．2009．03．041 【中图分类号】 R183．7 【文献标识码】 A 【文章编号】 1007—3205(2009)03—0315—03 DNA改组 (DNA shuffling)技术是一项全新 的 术改进上进行 了大胆的尝试 ，并取得了巨大的进步。 体外人工进化模式 ，是迄今为止所建立 的最有效 的 目前 ，主要有 以下几种。 分子进化技术 。近年来 ，随着该技术 的改进及高通 2．1 基 因家族改组 (DNA familyshuffling)：具有 量筛选方法 的日趋成熟和完善 ，DNA改组在基因工 两大特点，其一，改组基因的效率高。Crameri等_2 程疫苗开发 中表现出巨大的发展潜力 。人乳头瘤病 选用 了4种同源性为 58％～82％来 自不 同菌属 的 毒 (humanpapillomaviruS，HPV)低危型主要引起 头孢菌素 c酶基 因作为亲本 ，改组后使酶活性增加 肛门生殖器疣 ；高危型主要与生殖器肿瘤 的发生密 了270~540倍 ，而单基因改组只增加 了8倍 ；其二 ， 切相关 。随着 HPV 预防性疫苗 的问世 ，诸 多研 究 提高了突变机率。 者将 目光转 向 HPV 治疗性疫 苗研制方 面。而 2．2 交错延伸过程 (staggeredextensionprocess， DNA改组技术作为一种高效的体外分子进化技术 ， STEP)：该方法 的关键在于找到一个合适 的引物退 在 HPV治疗性疫苗的研制方面有着广 阔的应用前 火反应条 。Huimin等_3对成熟 的枯草杆菌蛋 白酶 景 。 E基因进行易错 PCR(error-pronePCR)突变 ，最后 在重组库中筛选得到了大约8000个在 75℃具有稳 1 基 本 原 理 定性 的突变株，其 中热稳定性最高的3个突变株在 DNA改组又称有性 PCR(sexualPcR)、分子 65℃的半衰期是野生型的25～50倍。 育种 (molecularbreeding)l1]。指通过基 因在分子 2．3 SCRATCH技术 ：该技术特点为不依赖基 因 水平上 的重组 ，再以定 向筛选具有预期性状 的突变 序列 同源性而产生多个 DNA杂交位点。Lutz等[4] 体 ，获得同时具有多个亲本基因的特征的突变基 因。 用大肠杆菌和人源甘氨酰胺核苷酸甲醛转移酶基 因 步骤简述如下，将由2个或 2个 以上具有 同源性 的 作为亲本 ，利用 SCRATCH 技术进行 改组 ，得到了 基 因为亲本基 因混合 ，以脱氧核糖核酸 (DNase工) 一 个突变基因库 ，其中近 209／6序列 中含有 2个交换 处理，经变性形成一系列随机切割 的小 DNA片段 ； 点，最高得到具有 4个三交换点的突变体 ；Liu__5等 在无引物 的情况 下，进行类似 PCR 的循环 ，这些 因此方法提高谷氨酰胺产量近 3O 。 DNA片段互相作为引物和模板进行链 的延长 ；随着 2