根癌农杆菌介导的水稻纹枯病菌转化系统的建立.pdfVIP

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2017-09-12 发布于江苏
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根癌农杆菌介导的水稻纹枯病菌转化系统的建立.pdf

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中国水稻科学(ChinJRiceSci)，2010，24(6)：617～622 httptf}Ⅶ ．ricesci．cn DOI：10．3969／j．issn．1001—7216．2O10．06．009 617 根癌农杆菌介导的水稻纹枯病菌转化系统的建立杨迎青# 杨媚# 李明海李勇贺晓霞周而勋 (华南农业大学植物病理学系，广东广州 510642；#共同第一作者；通讯联系人，E—mail：exzhou@scau．edu．cn) EstablishmentofAgrobacterium tumefaciens—MediatedTransformationSystem for RhizoctoniasolaniAG一1工A，theCausalAgentofRiceSheathBlight YANGYing—qing~ ，YANGM ei# ，LIM ing—hai，LIYong，HEXiao—xia，ZHOU Er-xun (DepartmentofPlantPathology，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China；#Theseauthorscontributedequallyto thispaper； C0rrPsp0 扎gauthor，Email：exzhou@$cau．edu．cn) YANG Yingqing，YANGMei，LIMinghai，eta1．EstablishmentofAgrobacteriumtumefaciensmediatedtransformationsys— tem forRhizoctoniasolaniA 1IA ，thecausa1agentofricesheathblight．ChinJRiceSci，2010，24(6)：617-622． Abstract：InordertoconstructtheT DNA insertionalmutagenesistransformation system forricesheathblightpathogenRhi— zoctoniasolaniA 1 TA ，thevirulentisolateGD1】8ofthispathogenwasselectedastheinitialisolatefortransformation． TheconditionsforthetransformationofGD118wereoptimizedin5aspects，i．e．pre—inductiontime，coculturetime，acetosy— ringoneconcentration atcoculturestage．coculturetemperatureand pH valuesofsolid induction medium (SIM )atcoculture phase．Finally，anAgrobacteriumtumefaciens—mediatedtransformation(ATMT)system forR．solaniAG一1IA wasestab— lishedsuccessfully．TheoptimalconditionsforthisATMTsystem areasfollows：theconcentrationofhygromycinBat30 g／ mIfortransformantscreening，8hofpre—inductiontime，2Ohofcoculturetime，200umol／L ofacetosyringoneinSIM at coculturestage。coculturetemperatureat25。C and PH 5．6to5．8ofSIM atcoeulturephase．Thetransformantsstillshowed high resistancetohygromycinB after5generations’subcultures．TentransformantswererandomlypickedoutforPCR verifi cation usingthespecificprimersdesignedfrom thehphgene，andtheresultsrevealedthata