分子生物学方法在污染土壤微生物多样性研究中的应用.pdfVIP

第41卷第4期 土 壤 学报 V01．41，No．4 2004年7月 ACTAPEDOLOGICASINICA July，2004 分子生物学方法在污染土壤微生物 多样性研究中的应用* 李 慧1，2 陈冠雄1，3 张 颖1 张成刚1 (1中国科学院沈阳应用生态研究所陆地生态过程重点实验室，沈阳110016) (2中国科学院研究生院，北京100039) (3沈阳大学，沈阳110044) 摘 要 综述了应用于污染土壤微生物多样性分析的各种分子生物学方法，包括DNA中m01％G+c 丰度的分析、核酸杂交技术、DNA复性动力学研究及基于PCR技术的DNA指纹图谱分析等方法。阐述了这 些方法的主要应用及各自的优势和局限性。 关键词 污染土壤；微生物多样性；PCR；DNA复性动力学；核酸杂交；m01％G+c 中圈分类号 Q938．1 文献标识码 A J。测定t001％G+C 土壤中存在着的大量微生物对整个生态系统产 落多样性变化的一个敏感指标【2 生着重要的影响，它们不仅是自然界有机物的分解 丰度的主要方法有热变性法、密度梯度离心、不同 者，而且是食物链中的初级生产者，在自然界的碳、 氮、硫、磷等元素的循环中发挥着重要作用。然而， 随着近代工农业的发展，大面积土壤受到严重污染， 在新的选择压力下可能导致土壤微生物群落多样性 构的变化，分析结果表明被Cd污染的土壤中微生 和结构的变化。以往对于土壤微生物多样性的研究 物群落组成与其他重金属污染有明显不同。但是这 是建立在传统的微生物培养和分离技术上的，然而 项技术也存在着一定的局限性，当m01％G+C相同 在自然界中可培养的微生物仅占很小的一部分(土 时，不能判定是微生物群落组成相同还是组成不同 3，为了摆脱对培养技术的依赖， 壤中约为0．3％)01 不能断定是微生物群落组成不同还是群落组成相同 20世纪80年代末至90年代初发展起来的一系列分 J在 子生物学技术被广泛应用于土壤微生物多样性的研 而所含各个菌种的比例不同。例如Sandaa等H 究。本文综述了近年来应用于污染土壤微生物多样 比较低浓度重金属污染、高浓度重金属污染和未受 性分析的各种分子生物学技术，这些方法大多基于 未发现m01％G+C的明显变化。因此，单独使用此 对土壤中直接提取的DNA或RNA分子的分析，包 技术并不能准确说明微生物群落多样性的变化，还 括DNA中t001％G+c丰度的分析、核酸杂交技术、 DNA复性动力学研究及基于PCR技术的DNA指纹需要结合核酸杂交等专一性更强的技术。 图谱分析等方法，阐述了这些方法的主要应用及各 自的优势和局限性。 2核酸杂交分析技术 核酸分子杂交技术是20世纪70年代发展起来 1总DNA中m01％G+C丰度分析 的一种新的分子生物学技术。它是基于核酸分子碱 不同种微生物含有不同的核酸比例，G+Cmol基互补配对的原理