棉花黄萎病菌液体培养特性及其毒素的生物测定.pdfVIP

·38 · 陕 西 农 业 科 学 2010(2) 棉花黄萎病菌液体培养特性及其毒素的生物测定 侯丽娟 。李 卫 ，刘燕霞 。杨家荣。毛 岚 (西北农林科技大学 植保学院，陕西 杨凌 712100) 摘 要 ：对 16株 陕西来源的棉花黄萎病菌代表茵系液体培养性状 的观察和测定结果表 明，茵株培养液颜色、 分生孢子浓度及蛋 白含量等性状差异明显。菌株毒素生物活性的研究表明，毒素对抗、感病 品种的毒害作用 差异显著，毒素浓度与致萎强度呈正相关性，50．／tg／ml毒素浓度处理 36h是观察棉苗发病 的最佳浓度、时间 组合。菌株液体培养特性与毒素生物活性有一定关系，菌株培养滤液蛋白含量与其致萎强度具有相关性。 关键词：棉花黄萎茵；液体培养；毒素；生物测定 棉花黄萎病 (VerticilliumdahliaeKleb)是 养液性状。14d后将培养液 12000rpm离心 ，取上 影响我国棉花生产的主要病害 ，该病 自上世纪 3O 清液，根据血球计数法测定分生孢子浓度 。 年代传人我 国后现已在我国广大棉产区造成严重 表 1 供试菌株 危害，并成为限制我国当前棉花生产可持续发展 的重要制约因素之一。该病是棉花生产中危害较 大的一种土传真菌病害，通过侵染棉花维管束系 统引起棉花叶片萎蔫 ，进而导致棉花减产，造成严 重经济损失 。为此 ，开展棉花黄萎病菌致萎毒素 研究 ，对揭示病原菌 的致病力变异及其致病机理 具有重要理论意义[1]。前人研究表明棉花黄萎病 菌(Verticilliumdahliae)培养液中产生的蛋白质 一 脂多糖复合体是导致棉花黄萎病的关键因 子[2]，但对培养性状与毒素活性 的相关研究较 1．3 培养滤液制备及蛋白含量测定 少 。采用液体培养和生物测定技术对陕西不同地 将上清液置超速冷冻离心机 4℃下，12000 域来源的 l6个棉花黄萎病菌系的液体培养特性 rpm离心 15min，用 0．45fire微孔滤膜过滤得到黄 及其毒素的生物活性进行研究。旨在明确棉花黄 萎病菌培养滤液[7]。按照考马斯亮蓝 G一250法， 萎病菌毒素的生物活性 ，探 明培养特性与毒素致 以牛血清蛋白作标准曲线 ，在 722型分光光度计上 萎作用的关系，从而为进一步揭示棉花黄萎病菌 595nm波长处测定培养滤液中的蛋白浓度。 的致病机理和制定病害综合防治措施提供理论依 据 。 1．4 病菌毒素制备 将培养滤液放置旋转蒸发仪中抽真空浓缩至 1 材料与方法 原体积的 1／40，再经 11000r／min离心 10min，取 1．1 材料 上清液于5mmol／1磷酸钾缓冲液 中(pH一6．7)透 供试棉花品种为抗病 品种中棉 45和感病 品 析 24h，得到黄萎病菌粗毒素[8]。 种陕2365，供试菌种是从陕西棉花产地采集 的病 1．5 病菌毒素对棉苗的毒害作用 株茎秆中分离纯化所得 (表 1)。 分别取2—3片真叶期的棉花幼苗，伤根后分 1．2 液体培养及培养特性测定 别浸 入 1O Inl不 同稀 释 浓 度 (80p．g／ml，50 将斜面保存的菌种转接到平皿培养 1周后 ，切