日本血吸虫新基因SjPP的筛选、克隆及对小鼠的免疫效果.pdfVIP

中国农业科学 2006,39(8):1659-1666 Scientia Agricultura Sinica 日本血吸虫新基因SjPP 的筛选、克隆及对小鼠的免疫效果 姚利晓，林矫矫，傅志强，朱传刚，李 浩，陆 珂，刘金明，石耀军，沈 阳，蔡幼民 ( 中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所／农业部动物寄生虫学重点开放实验室／上海动物生物技术研究中心，上海 200232) 摘要：【目的】筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因，并研究其免疫保护效果。【方法】利用 东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫（中国大陆株）成虫cDNA表达文库获得阳性克隆，以5′ RACE技术扩增获 基因全长序列，构建含目的基因的核酸疫苗并研究在小鼠中的免疫保护效果。【结果】（1）获得 4个日本血吸虫新 的EST序列，即mfs-1（GenBank登录号BE974942）、mfs-3（GenBank登录号BE974944）、mfs-4（GenBank登录号 BE974945）和 mfs-5（GenBank 登录号 BE974946）。（2）mfs-5 进行全长序列克隆，获得的日本血吸虫新基因 SjPP (GenBank 登录号 AY902477)长 1311 bp, 编码 302 个氨基酸，理论分子量为 34.7 kD，等电点为 5.51；其氨 基酸序列具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶（serine/threonine specific protein phosphatase，简称PP）的保守序列 LRGNHE，并且含有该酶特异性抑制剂冈田酸的作用位点 SAPNYC，与人的 PP6、鼠 PP6、果蝇 PPⅤ等蛋白的氨基酸 序列具有高度同源性，分别达72%、70%和 70%。（3）成功构建核酸疫苗pCMV-Script／ SjPP，免疫BALB/c小鼠诱 导产生肝组织减卵率为23.91%，粪便减卵率为31.91%。【结论】（1）获得日本血吸虫新的抗原基因SjPP。（2）含 SjPP 基因的核酸疫苗在小鼠中诱导了部分免疫保护效果。 关键词：日本血吸虫；东方田鼠；丝/ 苏氨酸蛋白磷酸酶；核酸疫苗；免疫保护 Screening, Cloning and Immunological Efficiency of SjPP, a Novel Schistosoma japonicum Gene YAO Li-xiao, LIN Jiao-jiao, FU Zhi-qiang, ZHU Chuan-gang, LI Hao, LU Ke, LIU Jin-ming, SHI Yao-jun, SHEN Yang, CAI You-min (Shanghai Institute of Animal Parasitology, Chinese Academy of Agricultural Sciences; Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai Research Center for Animal Biotechnique, Shanghai 200232) Abstract: 【Objective 】 The aim of the experiment is to screen and clone antigen genes of Schistosoma japonicum specific to the sera of Microtus fortis and study the protective efficiency. 【Method 】A cDNA library of Schistosoma japonicum adult worm was immunologically screened with the sera from Microtus fortis infected with the schistosome. Then mi