急性病毒性坏死病毒IAP-86基因的克隆、表达及抗凋亡研究.pdfVIP

第 卷第 期 水 产 学 报 年 月 文章编号 急性病毒性坏死病毒 基因的克隆表达及抗凋亡研究 张 帅 王崇明 宋晓玲 白昌明 黄 絰 李 晨 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业可持续发展重点实验室山东 青岛 上海海洋大学水产与生命学院上海 摘要 在已经完成的栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒 全基因 组序列测序与分析的基础上设计特异性引物克隆得到了 编码的杆状病毒凋亡抑制 蛋白基因 基因与 质粒连接构建得到重组质粒 将重组质粒转化到 中使用异丙基硫代半乳糖苷诱导蛋白表 达检测显示表达蛋白分子量约为 经 和质谱分析证明该 蛋白即为 融合蛋白 柱纯化后得到了纯化的 融合蛋白 将重组的 蛋白用标记荧光显微镜下观察发现重组的 蛋白最终能够与栉孔扇贝血淋巴细 胞的细胞核和细胞质结合 细胞凋亡检测实验发现重组的 蛋白能够在一定程度上抑 制栉孔扇贝血淋巴细胞凋亡凋亡抑制率为 本实验应用原核表达成功得到了 蛋 白并证明 对栉孔扇贝细胞的凋亡有一定抑制作用这为进一步研究 的侵染机 制提供依据 关键词 栉孔扇贝 急性病毒性坏死病毒 杆状病毒凋亡抑制蛋白 原核表达 抗凋亡 中图分类号 文献标志码 栉孔扇贝 是我国北方沿海 一个 家族高度保守的杆状病毒 重复区 主要的养殖品种在我国贝类养殖业中占有重要 不含有某些杆状病 地位 世纪 年代中末期养殖栉孔扇贝在 毒 基因含有的指环蛋白结构 根 夏季出现大规模死亡这给我国扇贝养殖业造成 据生物信息学分析结果人们将 编码的基 了重大损失极大地阻碍了这一产业的健康持续 因命名为 发展 已有的研究表明急性病毒性坏死病毒 细胞凋亡是指在一定的生理或病理条件下 是导致栉孔扇 细胞受内在遗传机制的控制 自动结束生命的过 贝大规模死亡的主要病原 程 杆状病毒的凋亡抑制蛋白基因是最早鉴定的 本实验通过对已测序完成的 全基因 家族基因与杆状病毒 基因有相似的抗细 组序列分析预测 全基因组中含有 个 胞凋亡功能 所有 基因序列中都含有保 潜在的开放阅读框 守结构域该结构域包含一个保守的组氨酸 其中 个 具有一定的结构和功能推测可 残基以及三个保守的半胱氨酸残基某些杆状病 能与病毒 复制核酸代谢修饰以及病毒与 毒 基因含有保守的指环蛋白结构 宿主相互作用等有关 进一步的生物