9106基于基因芯片的药物评价技术指导原则.pdfVIP

  9106 基于基因芯片的药物评价技术指导原则 本指导原则规定了将基因芯片技术用于药物安全性和有效性评价的原理、定义、主要技术指标和 待测样品的要求、样品图谱的制作及分析方法。目的是规范基于基因芯片技术的药物安全性、有效性 评价研究，为该类研究的实验设计、方法学建立等过程和测定方法的适用范围提供指导性的原则要求。 一、定义及原理 药物基因组学（Pharmacogenomics ），又称基因组药物学或基因组药理学，是药理学的一个分支， 定义为在基因组学的基础上，通过将基因表达或单核苷酸的多态性与药物的疗效或毒性联系起来，研 究药物如何由于遗传变异而产生不同的作用。 毒理基因组学（toxicogenomics ）是从多基因、全基因组水平研究毒物作用与基因表达的相互影响， 其研究内容主要包括3 个方面：促进环境应激原与疾病易感性关系的理解、阐明毒性分子机制、筛选 和确认与疾病和毒物暴露相关的生物标志物（biomarkers ）。 DNA 微阵列（DNA microarray ）又称DNA 阵列或DNA 芯片，比较常用的名字是基因芯片（gene chip ）。是一块待用DNA 微阵列（microarray ）的特殊玻璃片或硅芯片，在数平方厘米之面积上部放数 千或数万个核酸探针；样品中的DNA 、cDNA、RNA 等与探针结合后，借由荧光或电流等方式检测 每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。经由一次测验，即可提供大量基 因序列相关信息，以高通量、多因微型化和快速灵敏的特点而见长。 原理：利用生物分子相互间的特异识别作用进行生物信号处理。 根据检测样本的不同，基因芯片可分为表达谱芯片（cDNA 芯片）、SNP 芯片、miRNA 芯片、siRNA 芯片、高通量核酸定序芯片（ChIP-chip ）和基因甲基化芯片等。 二、基本原则 符合药物基因组学研究基本原则 基于基因组学技术的药物安全性、有效性评价方法应符合药物 基因组学研究的随机、对照、重复的基本原则；具备简单、精确的特点；应有明确的判断标准。 三、基本内容 1. 生物样本的获取 试验系的选择 基于基因芯片技术的药物安全性、有效性评价方法中所用的试验系，包括整体动 物、离体器官、血清、组织、细胞等。试验系的选择与试验原理和测定指标密切相关，应选择背 景资料清楚、影响因素少、检测指标灵敏和成本低廉的试验系统。应尽可能研究各种因素对试验 系的影响，采取必要的措施对影响因素进行控制。 如采用实验动物，尽可能使用大鼠和小鼠等来源多，成本低的实验动物，并说明其种属、品系、     性别和年龄。实验动物的使用应遵循“优化、减少、替代” 的“3R”原则。 供试品选择 应选择工艺稳定，质量合格的供试品。若为饮片，应基源清楚。应至少使用3 批供 试品。 标准品或对照品选择 采用标准品或对照品均应有理论依据和/或实验依据。国家标准中采用的标 准品或对照品的使用应符合国家有关规定要求。 2. 生物实验设计 设计原理 所选实验方法的原理应明确，检测指标灵敏度高，客观、专属性强。 设计类型 试验设计可考虑设供试品组、阴性对照组或阳性对照组，使用动物模型应考虑设置模 型对照组。对于重现性好的试验，可不设或仅在复试时设阳性对照组。 剂量设计 按照生物检定的要求，参照药物临床用药剂量进行合理的剂量设计，试验剂量的选择 以产生采用基因芯片能检测到生物效应为宜；在制订质量标准研究中，应采取多剂量试验，并充分说 明标准中设定限值剂量的依据。 给药途径 与临床用药途径一致。如采用不同的给药途径，应说明理由。 给药次数 根据药效学研究合理设计给药次数，可采用多次或单次给药，尽量与临床用药给药次 数一致。 指标选择 应客观、明确、专属，与“功能主治”相关。 生物样本处理 应尽量使用无菌、一次性塑料制品，已标明RNase-free 且未开封过的塑料制品； 在试剂中可适当加入一定量的RNA 稳定剂；尽量确定每次处理样本的最大数量，减少处理过程对RNA 整体性的影响；需要对影响RNA 质量的多个因素进行评价：如样品量等。在收集到生物样本后，最 好能即刻进行RNA 制备工作，若需暂时储存，则应以液氮将生物样本急速冷冻后，储存于-80℃冰箱 中，在制备RNA 时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨