BMP7和EGFP重组腺病毒体外转染兔骨髓间充质干细胞的研究.pdfVIP

维普资讯 四J¨医学 2008年 2月第 29卷(第2期) Sichuzu~MediccdJournal，2008，I ．29，No．2 ·l29 · 论著 BMP7和 EGFP重组腺病毒体外转染兔骨髓间 充质干细胞的研 究 刘永亮 ，叶 钢 ，易善红 ，方针强 ，张英 (1第三军医大学新桥医院泌尿外科，全军肾脏病中心 ，重庆 400037；2．中国人民解放军第 148医院泌尿外科 ，山东 淄博 255300) 【摘要】 目的 观测体外培养的兔骨髓 间充质干细胞生物学特性，并转染重组腺病毒 Ad5。EGFP-BMP7，观察BMP7 与EGFP的表达情况。方法 通过密度梯度离心联合贴壁法，分离、纯化间充质干细胞；流式细胞仪检测细胞周期和表面 标记；体外诱导间充质干细胞向成骨细胞、成脂肪细胞分化并鉴定。转染后，荧光显微镜及免疫细胞化学染色检测外源 基因的表达。结果 原代及传代间充质干细胞为成纤维细胞样细胞；87％以上处于C~／Ga期；cD表达阳性，cD表达阴 性；经成骨细胞诱导后 ，碱性磷酸酶染色阳性 ，并有矿化结节形成；经成脂肪细胞诱导后，细胞 内出现大量脂滴。转染 Ad5，EGFP-BMP7后，荧光显微镜下可见EGFP表达阳性；免疫细胞化学染色显示细胞 内BMP7表达时性。结论 成功分 离、纯化间充质干细胞，并鉴定其具有成体干细胞特性；重组腺病毒介导BMP7和EGFP体外成功转染间充质干细胞 ，并 稳定表达 BMP7、EGFP，为下一步实验奠定了基础。 【关键词】 骨髓间充质干细胞；骨形态发生蛋白7；增强型绿色荧光蛋白；基 因转染 【中图分类号】Q7 【文献标识码】 A 【文章编号】 1004-0501(2008)o2。0129。03 Study0fBMP7andEGFPreconbinantadenovirustransfectino onrabbitboneInalTOW derivedmesenchym~ stem cellsin vitro．HUYong-liang，YE ，I7Shan-hongteto1．DepartmentofUrinarySurgery，RenalDiseasesResearchCenterofPIA，X~nqiao Hospital。 MilitaryMedicalUniversity，Chongqing400037，China A【bstract】Objective Toobservebiologicalcharacteristicsofrabbitbone wderivedmesenchymalstemcellsculturedin vitro，andexpressionofBMP7nadEGFPafterAdS—EGFP-BMP7infectde onthem．Methods Toisolatepurifythecellsbydensi~ gra· dientcentrifugationnadadherentcultureinvitro．Detectedcellmembrane’smarksnadcellcyclebyflow cytometer．Mesenchymal stem cellswere inducde intocsteogeneticceUsintheosteogenesissupplementIll~ th-noradiposecellsinadipogenesissupplementmedium ， nadhtentheywereverifide．DetcetdeexpressionofexogenousgeneinthecellsbyfluorescencemicroscopenadImmunceytochemical stain．Results Themorpheusofhteprim~ycellsnadpassagecellsissimila