尼美舒利抑制结肠腺癌细胞Colo-320增殖凋亡机制研究.pdfVIP

尼美舒利抑制结肠腺癌细胞 Colo．320 增殖凋亡机制研究 A StudyontheMechanism ofNimesulideInhibitingProliferationandApoptosisinColon AdenoearcinomaCellLineColo一320／／ZHOUHong-kun，CHENXu-jia~，SHENYique，eto1． 周鸿鲲 ，陈徐艰 ，沈亦珏 。，王晓光 ，倪全法 1浙江大学医学院，浙江 杭州 310058： 2．嘉兴医学院附属第二医院，浙江 嘉兴 3140001 摘 要 ：f目的]研究选择性环氧合酶一2(COX一2)抑制剂尼美舒利对人结肠腺癌细胞 Colo一 320增殖凋f_的影响及机制 f方法]Mrr法检测经不 同浓度处理的 Colo一320细胞增殖率 ． 流式细胞术检测其凋亡率 ．RT—PCR及 WesternBlot法检测 COX一2、Bcl一2、VEGF的mRNA、 蛋 白表达率。 结『果]经 50、100、200、300~molL／尼美舒利处理的 Colo320细胞增殖率分 别为 0．98+0．16。0．95±0．09，0．51±O．06和 0．48_+0．08，凋亡率分别 为 9．52_+0．41、12．11±0．71、 28．13±3．65和 39．37~4．15。药物处理后的 Colo一320细胞 中COX一2的mRNA、蛋 白表达在各 组问无统计学差异 (PO．05)，Bcl一2及 VEGFmRNA、蛋 白表达在高浓度组较低浓度组 、对 照 组明显降低 (P0．01)。 结『论]尼美舒利可能通过下调抗凋 因子(Bcl一2)及血管 内皮生 成网子 (VEGF)表达来抑制 Colo一320细胞增殖 、诱导凋 主题词 ：环氧合酶一2；尼美舒利 ；结肠腺癌细胞 ；增殖 ；凋亡 中图分类号：R735．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671—170X(2011)05—0350—03 环氧合酶一2(COX一2)1994年首次被报道在结肠 司)；蛋 白定量试剂盒 (美 国PIERCE公司)；蛋 白酶 癌组织 中高表达 ，后逐渐成为肿瘤研究 的重要靶 抑制剂 (美国Calbiochem公司)；COX．2、Bcl一2、VEGF 点。尼美舒利 (Nimesulide)作为COX．2选择性抑制 等一抗 、ECL试剂盒 (美国SantaCruz公司)。 剂 ，除能抑制激活的白细胞产生氧 自由基 ，减轻炎症 1．2 方 法 时氧 自由基导致 的组织损害 ，抑制组胺释放和 白i 1．2．1 四唑盐比色实验 (M1丫r) 烯合成 ，具有较强抗炎、镇痛作用 ，而且其对多种肿 Colo一320细胞用含 10％胎 牛血清 的DMEM培 瘤细胞抑制以及在早期肿瘤预防方面的作用也越来 养液在 37。C、5％C0 及饱和湿度 的条件下传代培 越得到国内外学者的关注。本实验利用选择性 COX一 养 ，制单细胞悬液 ，稀释成 5．0x104／ml；以每孔 1．Oxl0 2抑制剂尼美舒利作用于结肠腺癌细胞 Colo一320， 个分种于96孔板 ，尼美舒利培养基分 50、100、200、 300pmlol／L4个浓度 ，每个浓度设 4个平行孔 ，设空 探讨其影响结肠癌细胞增殖凋 的机制 白对照组 ，72h后每孔加入 MTT溶液 (5mg／m1)201xl， 孵 育 4h后吸去上清 ，每孔加入 200pJDMSO：酶标 1 材料与方法 分析仪测定 OD∞值 ，最后计算细胞增殖率 (加药孔 OD值 ／对照孑LOD值)。 1．1 材 料 1．2．2 流式细胞术 人结肠腺癌细胞株 Colo．320由中科 院上海细 取指数生长期 的Colo一320细胞 ，