β1整合素抗体阻断对LoVo细胞与Ⅰ型胶原黏附的影响.pdfVIP

维普资讯 广东医学 2008年3月第 29卷第 3期 GnAngdolJgMedicalJournalMar．2008．Vo1．29。No．3 · 399 · p。整合素抗体阻断对 LoVo细胞与 I型 胶原黏附的影响 童华生 赖晓嵘 张亚历 姜泊 广‘州军区广 、医院lctJ(广州 51oo1o)；广东省人民医院消化科(广州 51oo8o)；南方医科大学南方医院消化 科(广州 510515) 【摘要】 目的 观察13。整合素在大肠癌 LoVo细胞与细胞外基质黏附中的作用。方法 采用激光共聚焦显 微镜检测 13。整合素在LoVo细胞的表达。13。整合素单克隆抗体加入LoVo细胞悬液中37℃反应30min，流式细胞 仪分析其与LoVo细胞膜表面13。整合素结合情况。13。整合素单克隆抗体阻断后，观察黏附于 I型胶原 LoVo细胞 形态学和数量变化。同时观察LoVo细胞趋化运动的变化。结果 激光共聚焦显微镜显示 13．整合素表达于LoVo 细胞膜。13。整合素单克隆抗体预孵LoVo细胞30min后流式细胞仪检测其结合率为(95．57±6．92)％。13。整合 素抗体阻断后 ，不规则角形黏附细胞减少，主要为圆形或类圆形；45min计数与 I型胶原黏附LoVo细胞数分别为 100±8和 153±15(P0、001)；趋化运动细胞分别为 18±7和31±9(P0．001)。结论 B1整合素抗体阻断后 能抑制LoVo细胞与 I型胶原的黏附，下调其趋化运动特性，膜表面 13．整合素可能为大肠癌黏 附、侵袭和转移重 要蛋 白质分子之一 。 【关键词】 13．整合素 大肠癌 抗体阻断 黏附 趋化运动 癌症的侵袭是由细胞和细胞外基质的相互作用介 10／ml细胞悬液。 导的复杂过程 ，癌细胞与细胞外基质的黏附为癌细胞 1．2．2 13。整合素表达 按上述将细胞制备成 1× 的侵袭、转移提供前提 ，而癌细胞运动性为该过程中的 10／ml悬液 ，加入2ml细胞悬液于Petri小皿中，37℃， 动力保障。13亚家族整合素主要与细胞和细胞外基 5％CO培养6h。弃去培养液，4℃预冷 PBS冰上洗 质黏附有关 ，能与基质成分结合”，在许多肿瘤转移中 5min×3次 ，4℃预冷 多聚甲醛 固定 30rain，PBS洗 发挥重要作用。为了解 13．整合素在 LoVo细胞与细胞 5rain×3次 ，山羊血清封闭30min，倾去待干；1：100稀 外基质黏附和细胞趋化运动中的作用，我们检测了13． 释 13．整合素单克隆抗体4oc反应过夜 ，PBS洗5rain× 整合素在LoVo细胞的表达，利用 13。整合素抗体阻断， 5次；1：32稀释山羊抗小 鼠FITC标记 IgC二抗室温避 初步探讨 13，整合素在LoVo细胞黏附和趋化运动中的 光反应 1h，PBS洗 5rain×5次；激光共集焦显微镜 (Leica)分析。 作用。 1．2．3 13、整合素抗体 阻断与细胞黏附 实验分为抗 1 材料与方法 体阻断组和对照组 ，每组6复孔。I型胶原 (1mg／m1) 1．1 材料 LoVo细胞株为南方医科大学南方医院消 储备液用PBS稀释后加入48孔培养板 ，每孔 20恤g， 化病研究所传代培养。Transwell小室购于COSTAR公 4℃包被过夜。PBS洗2次后，用变性 1％BSA37℃封 司；RPMI1640培养液购于 Gibco公司，小牛血清 (fetal 闭非特异性位点，按 10Ixl／lO细胞加入 13。整合素单 calfserum，FCS)购于杭州四季青有限公司；I型胶原 克隆抗体，37oc反应 30min，对照组加入小 鼠免疫球蛋 购于美国Sigma公司，用 0．1mol／L醋酸溶解后配成 白；每孔加入细胞悬液 200 l，动态观察细胞贴壁情 1．25mg／ml储备液；多聚甲醛购于美国Sigma公司，配 况；90rain后终