川芎嗪对溶血磷脂酸致新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及分泌细胞因子的影响.pdfVIP

维普资讯 实 验 研 究 川芎嗪对溶血磷脂酸致新生大鼠心肌成纤维细胞 增殖及分泌细胞因子的影响 蔡 辉 赵智明 修春英 郭郡浩 赵凌杰 (南京军区南京总医院，江苏南京 210002) 摘 要 目的：探讨川芎嗪 (TMP)对溶血磷脂酸 (1JPA)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞 (CFs)增 殖 以及分泌转化生长因子 B 的影响一方 法：采用胰酶消化法和差速贴壁法获取 CFs，采用 MrITI1法检 测细胞增殖．用酶联免疫吸附测定法 (ELISA)测定不同条件下培养的CFs培养液上清中的TGF3[，水 平 结果 ：TMP对 CFs增值的抑制作用随浓度 的升高而增强 ．其 中10mg／mLTMP抑制作用随时问的 延 长而显 著增 加 ．5、20mg／mL浓度 则在 作 用 72h后抑 制 作 用显著增 强。TMP对 LPA 致 CFs分泌 TGF3[ 的抑制作 用也 随浓度的升高而增强，其 中5mg／mLTMP抑 制作 用随 时间的延 长而显著增强 ， 10、20mg／mL浓度 则在作用 72h后抑制作用显著增强。结论 ：TMP可以浓度依赖性地抑制CFs增殖及 分泌TGF3[。，作用时间以 72h以上 为佳 ，TMP可能通过抑制TGF3[】的分泌抑制 CFs增殖 关键词 川芎嗪 心肌成纤维细胞 转化生长因子 13．SD大鼠 中图分类号 R282．710．5 文献标识码 A 文章编号 1672—397X(2008)03—0076—03 心肌成纤维细胞 (Cardiacfibroblasts．CFs)可在溶 血磷脂 1．4 实验分组与样品培养液制备 在第 2代 CFs达到亚融 酸 (LPA)刺激下增殖．从而促进心肌纤维化 (myocardialfibrosis， 合状态后换用含 5％新生牛血清的 DMEM无酚红培养液预适 MF)的发生 川I芎嗪(tetramethylypyrazine，TMP)是从中药川芎 应 24h．根据实验分组换用 0．2％低浓度血清培养液 实验分 5 巾提取的一种活性生物碱—— 四甲基吡嗪．具有活血 化瘀 、改 组 ，每组设 6个复孑L，分别为空 白对照组 (无血清培养液 )、 善微循环的作用 本研究试图通过体外培养 的方式，探讨TMP LPA对 照组 (仅含 LPA 1×10no1／IJ)、A组 (IJPA 1×10mol／L+ 对 LPA致新生大鼠CFs增殖以及分泌细胞因子的影响。 TMP 5mg／L)、B组 (LPA 1×10 mol／L+TMP lOmg／L)、C组 1 材料与方法 (1JPA 1×10mo~L+TMP20mg／L)，每浓度用 6孑L的无酚红高 1。1 实验动物 1~4 日龄新生清清级SpragueDawley (SD)大 糖 DMEM 培养基分别继续培养 24、48、72h．收集培养液 ．加入 鼠 15只．雌雄不限．由南京军区南京总医院动物实验中心提供。 抑肽酶 ．保存于一70℃冰箱备检测用。 1。2 药物 与试 剂 溶 血磷脂 酸标准 品 (1mg，Sigma公 司产 1．5 MrITI1法检 测细胞增 殖活性 取对数生长期细胞 ．以5× 品)：高糖 DuIbecco’SModifiedEagle’sMedium(DMEM)培养 10 个 ／mL密度接种于96孑L板 ．每孑L200~L．置 于 37℃、5％ 基 ．高糖无酚红 DMEM培养基 (GIBCO产 品)；胰蛋 白酶 、四甲 CO，及饱和湿度 下培养 ．24h后换无血清 DMEM 培养液 ．在 基偶氮 唑盐 (MrITI1)、二 甲基亚砜 (DMSO)为 Sigma公司产 品； 37℃继续孵育 24h根据需要分别换用 已配制好 的不同浓度含 新生牛血清 (杭州 四季青公司)；抗波形蛋白抗体 、抗结蛋 白抗 药培养液．