蛋白A／G在PPRH蛋白ELISA中的应用研究.pdfVIP

维普资讯 中国动物检疫 2008年第 25卷第 3期 嘲螓 一32一 文章编号 ：1005—944X(2008)03—0032—02 蛋白A／G在 PPRH蛋白ELISA中的应用研究 张喜悦 1l2】王志亮 ) 刘春菊 ’ 赵 昆 】 宁浩然 1】张志东 。】范伟兴 】何昭阳 ’】 (1吉林农业大学动物科技学院 长春 130118：2中国动物卫生与流行病学中心 山东青岛 266032： 3动物卫 生所 英 国伦敦 GU24ONF) 摘 要 ：分别 以山羊、绵羊和牛的阳性血清和 阴性血清作为待检血清，分别 以酶标蛋 白A／G、酶标兔抗山羊抗 体、酶标兔抗绵羊抗体和酶标兔抗牛抗体作为酶标二抗 ．进行 以小反刍兽疫 (PPR)裂解蛋 白为抗原和基于抗血凝素 (H)蛋 白的单克隆抗体的PPR H蛋 白酶联免疫吸附(ELISA)试验。结果四种酶标抗体均分别能使山羊、绵羊和牛阳 性血清的百分抑制率达到 100 在阳性血清百分抑制率为 100时．检测山羊时酶标蛋 白A／G、酶标兔抗山羊抗体的百 分抑制率分别为 17、12．检测绵羊时酶标蛋 白A／G、酶标兔抗绵羊山羊抗体的百分抑制率分别为 20、16，检测牛时酶 标蛋 白A／G、酶标兔抗牛抗体的百分抑制率分别为 14、13。结果认为．酶标蛋 白A／G而且与酶标抗抗体相 比，具有本 底低的优点．在PPR H蛋 白ELISA试验 中可以同时应用于检测山羊、绵羊和牛血清并具有较好效果。 关键词：小反 刍兽疫；病原 ：诊断技术；疫苗 小 反刍兽疫 fPestedesPetits 如 Anderson等使 用针对 H蛋 白的 为 SIGMA公司产品 Ruminants．PPR)是 由副粘病毒科麻 单 抗 和 裂 解 抗 原 建 立 了竞 争 1．4 参考阳性血清：山羊、绵羊、牛 疹病毒属小反刍兽疫病毒引起的一 ELISA 该试验 中可 以选择不 同的 PPRV 阳性 血 清均 由 OIE Pirbrige 种山羊和绵羊的急性或亚急性病毒 二抗 ，如酶标抗绵羊抗体 、酶标抗牛 PPR参考实验室保存 病 PPR是联合国粮农组织 (FAO)／抗体等 ．我们试 图利用酶标蛋 白A／1．5 参考阴性血清：山羊、绵羊、牛 世界动物卫生组织 (OIE)规定的 A G．对 PPRV不 同的易感动物进行检 PPRV阴性血清均为无临床症状 、多 类烈性传染病 ．我国规定为一类动 测 ．以确定该试验在不 同动物 中的 项检测结果阴性、解剖无病变非疫区 物疫病 对于小反刍兽疫的血清学 应用价值 ．现将我们 的工作汇报如 动物血清 诊 断试 验 主 要 有 病 毒 中和 试 验 下 。 1．6 C—ELISA的操作 (VN)和竞争 ELISA，目前开展最多 1 材料与方法 1．6．1 抗原包被 ：抗原用包被液稀释 ’的是 ELISA诊断方法 的研究 PPRV 1．1 酶 标 测 定 仪 ：SunfiseRmote／为 1：100的工作浓度 ．于酶标板上每 蛋 白主要有结构蛋 白核蛋 白(N)、 TouchScreen酶标仪 孔 加 入 50u1．37℃震 荡作 用 包 被 磷蛋 白(P)、基 质蛋 白(M)、融合蛋 1．2 酶标洗板机：TECANM8／4R型洗 1h。倒转酶标板．甩去其中液体 。使用 白(F)、血凝素 (H)、大蛋 白(L)和一 板机 。 洗板机或手工洗涤，至少 3次 ．在吸 些非结构蛋 白成分 作为包被抗原 1．3 酶标抗体 ：酶标兔抗山羊抗体 、 水纸上拍打干净 使用过 的主要有 N蛋 白和裂解病 酶标兔抗绵羊抗体、酶标抗羊单抗 、 1．6．2 加入待检样品和单克隆抗体 ： 毒 ．在早期研究主要使用裂解抗原 ． 酶标兔抗牛抗体 、酶标蛋白A／G等均 洗涤完成后 ．于酶标板所有孔 中加入 疗效果明显优于其水剂组 (PO．05)： 奶牛附红细胞体 比较有效的药物 ．并 J【]．日本兽医师会杂志，1982，35~)：76～ 感染对照组附红细胞体 的感染率在 能控制疫情．但不能彻底杀灭附红细 85． 整个治疗过程 中变化不大 ：健康对照 胞体 ，因为一条茂等m(198