蛋白核小球藻核酮糖-1，5-二磷酸羧化／加氧酶小亚基部分基因序列的克隆与分析.pdfVIP

维普资讯 蛋白核小球藻核酮糖一1，5一二磷酸羧化 ／加氧酶小亚基部分基 因 序列的克隆与分析 孙 雪，马 斌 ，周成旭 (宁波大学 海洋生物工程重点实验室，浙江 宁波 3152i1) 摘要 ：以单细胞绿藻蛋 白核小球藻(Chlorellapyrenoidosa)(藻株编号为 NMBluh015-1)为实验材料 ，利用几 种绿藻 中的核酮糖一1，5一二磷酸羧化 ／加氧酶 (Rubisco)的小亚基 (rbcS)的保守序列，设计简并引物 ，克隆到 rbcS的一奈 cDNA(245bp)和 3条 DNA序列 (其编号为 CP1、CP2和 CP3，长度依次为 1425bp、81Obp、 705bp)。序列比较结果表明，该蛋 白核小球藻rbcScDNA核苷酸序列与普通小球藻(C．vulgaris)、杜 氏藻 (Dunaliellatertiolecta)(rbcS1和 rbcS2)及蛋 白核小球藻 “太阳小球藻”株 的相似性依次为 93 、92 (91V00) 和 9O ，而其编码 的氨基酸序列与杜 氏藻相似性最高(80 )；3条 rbcSDNA序列与绿藻及高等植物 rbcS部 分序列表现了较高的同源性，其中2条DNA(CP2和 CP3)部分区段同源性很高。实验结果表明扩增得到的 cDNA和 DNA序列为蛋 白核小球藻 rbcS基 因。 关键词 ：蛋 白核小球藻(Chlorellapyrenoidosa)；小亚基 (rbcS)；克隆；同源性 中图分类号 ：Q781 文献标识码 ：A 文章编号：1000—3096(2008)03—0040—04 核酮糖一l，5一二磷酸羧化 ／加氧酶 (ribulose—l，5一 究 以小球藻属的蛋白核小球藻 (Chlorellapyrenoid— bisphosphatecarboxylase／oxylase，简写为 Rubisco) OSa)为实验材料 ，根据相关绿藻 rbcS核苷酸保守序 广泛存在于绿色植物 、藻类和某些光合细菌 中，是重 列设计 引物 ，克 隆 了该小球藻 rbcS的 cDNA 和 要的光合作用限速酶。该酶具有催化 cO 的固定和 DNA部分序列 ，以期为 rbcS基 因全序列的获得 ，进 二磷酸核酮糖加氧反应 的双重功 能，是 自然界 中丰 而为蛋 白核小球藻 rbcS结构 的阐明和功能 的解释 度最大 、植物体 内含量最高 的可溶性蛋 白之一。常 提供资料 。 见的Rubisco全酶由8个大亚基 (rbcI)和 8个小亚 1 材料与方法 基 (rbcS)组成 ，其 中大亚基主要起 固定 cO。的催化 作用 ，而小亚基则起着影响酶 的催化效率 ，以及 1．1 蛋 白核 小球藻 cO ／o 的专一性结构 区域 的作用 ]。近年来 ，rbcS 蛋白核小球藻来 自宁波大学海洋生物工程实验 基因的结构、功能、基 因表达和启动子活性等方面的 室，编号为 NMBluh015-1。培养条件为 MAV3号海 研究报道很多[2]，已经成为植物光合作用和基 因工 水培养基 ，温度为25℃，光强为2000lx，光暗周期为 程研究的热点。在单细胞绿藻中，杜氏藻 (Dunaliel- 12L ：12D。 latertiolecta)、微绿球藻 (Nannochlorisbacillaris) 1．2 试 剂与引物 和莱茵衣藻 (Chlammydomonasreinhardtii)已有关