钙蛋白酶Ⅰ（CAPNⅠ）基因在不同鸡品系中的遗传多态性分析.pdfVIP

维普资讯 《黑龙江畜牧兽医)2oo8年第3期 锈 酶 墅 卫 圄莛 同 羁 申 遣德 憧分析 张增荣，朱 庆 (四川农业大学 动物科技学院，四川 雅安625014) 中图分类号：$831 文献标识码：B 文章编号：1004—7034(2008)03—0027—03 钙蛋白酶 I(CAPN1)广泛存在于各组织，是细 3处发生突变，位点A、B、C位于extron5、extron6和 胞质中主要的蛋白水解酶，在肌原纤维蛋白降解中起 extronl6。对这3个位点所设计的引物见表 1。 着重要的作用。肌肉增长和宰后嫩度的变化与蛋 白 表 1 A、B．c3个位点的引物 质水解程度密切相关，肌肉蛋白质的增加取决于肌肉 位点产物大小／bp {I物序列 退火温度／℃ 蛋白合成速度和降解速度，因此，钙蛋白酶系统有可 能在肌肉发育中起着调控作用。 研究对鸡钙蛋 白酶 I(CAPN1)基因mRNA序列 进行PCR—SSCP分析，并首次检测了四川省畜牧科 学研究院和大恒家禽育种有限公司培育的8个优质 肉鸡品系的突变位点，并进行了多态性分析，为监测 保种效果，及时调整保种方案，以及为优质肉鸡品种 资源开发利用提供科学依据。 PCR扩增总体积为 1O ，PCR扩增体系的组成 1 材料和方法 为2×TaqPCRMasterMix5 、ddH203．6 、引物 1．1 试验材料 ‘ (10pmol／ )各0．3 L、模板 DNA(50ng／L) 来 自四川省畜牧科学研究院和大恒家禽育种有 0．8 L。PCR扩增程序：预变性94℃6min；94℃ 限公司培育的优质肉鸡 OS3、OS2、OS5、S01、D99系 45S，58℃(各位点有所不同)45S，72oC1min，35 (父母代)，OSl×S10、OSl×OS5、OSl×D99系 (商品 个循环 ；最后72℃继续延伸 8min。PCR产物用 1％ 代)，每个品系各取 3O只，公母各半。各品系的生长 琼脂糖凝胶电泳检测，结束后用 UVP凝胶成像系统 速度不同，90日龄时采集样品，给每只鸡编号，屠宰 分析检测扩增结果。 时采血，EDTA抗凝，置于冰盒，带回实验室。参照孟 1．4 SSCP分析 安明等的方法并作适当改动进行DNA抽提。离心去 2．4 PCR产物和O．8 L的6×loadingBuffer 血浆后酚／氯仿抽提，基因组DNA于TE溶液中溶处 混合并离心，98℃变性 10min，迅速插入冰中，使之 理后于实验室一2O℃冰箱中保存。 保持变性状态。12％非变性聚丙烯酰胺凝胶，(Acr： 1．2 主要试剂 Bis=29：1)电泳。10V／cm 电泳 1O一11h后，银染 引物由上海英骏生物技术有限公司合成；2×Taq 显色。 PCRMasterMix购 自北京天为时代公司；测序反应和 1．5 测序 纯化 由上海英骏生物技术有限公司完成；其他试剂购 经SSCP分析后，取2个不同基因型纯合个体的 自博瑞克公司。 PCR扩增产物，在上海英骏生物技术有限公司进行 1．3 引物设计和PCR扩增 纯化和测序 ，然后进行序