黄芪注射液对烟碱损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用.pdfVIP

福建 中医药大学 学报 2011年 8月 第 21卷 第 4期 JournalofFujianUniversityofTCM August2011，21(4) 19 黄芪注射液对烟碱损伤人脐静脉 内皮细胞的保护作用 涂春香 ，谢佐福 ，陈江荣 ，陈小明 ，叶小包 (1．福建中医药大学 中西医结合学院，福建 福州 350108；2．江西省上饶卫生学校 ，江西 上饶 334100) 摘要 ： 目的 观察黄芪注射液对烟碱损伤人脐静脉 内皮细胞 (HUVEC)的保护作用及分子机制。 方法 MTT法检测烟碱 、黄芪对 HUVEc细胞生长的影响 ，硝酸还原酶法检测总N0 水平 、化学 比 色法检测 HUvEC细胞总 N0S水平、酶联免疫法检测ET一1的水平。 结果 烟碱作用后的HU． VEC细胞 总N0 水平和 总NOS水平均 降低 显著 (P0．叭)，而ET-1水平则 显著上升 (P0．01)；黄 芪作用后细胞总 NO水平和总 NOS水平均显著上升 (尸O．O1)，ET-1则水平显著 降低 (P0．O1)；与 烟碱组比较 ，黄芪预处理加烟碱组的总N0水平和总NOS水平均有显著上升 (P0．05)．ET-1显著下 降(P0．05)。 结论 黄芪在一定程度上能保护 HUVEC细胞免受烟碱损害。 关键词 ：黄芪：烟碱 ；人脐静脉细胞 中图分类号：R285．5 文献标志码 ：A 文章编号：1004—5627(2011)O4—0019—02 动脉粥样硬化 (atherosclerosis，AS)是 心脑 管 分为以下 5组 ：空 白对照组 (不用黄芪 、烟碱和 d一 疾病形成 的病理基础 ．其始动环节为血管 内皮细 筒箭毒碱处理)；A组 ：单用烟碱处理 (104mol／L)； 胞损害 ，主要危险因素包括高血压 、高血脂 、糖尿 B组 ：单用黄芪处理 (200Ixg／mL)；C组 ：d一筒箭毒 病和吸烟 。吸烟已经被公认为是AS形成的一个独 碱加烟碱处理 (10 mol／Ld一筒箭毒碱预处理后 立危险因素。吸烟能影响血管舒缩功能…，促进血 加 104mol／L烟碱)；D组 ：黄芪组加烟碱处理 管平滑肌细胞迁移 ]，甚至也能升高血脂 [33。本研 (200p~g／mL黄芪组预处理后加 10 mol／L烟碱)． 究探讨黄芪对烟碱损伤血管 内皮细胞 的保护作 每组 l0瓶 。 用 ，报告如下。 1．2．2 NO、ET一1、NOS含量的测定 采用 硝酸还 1 材料与方法 原酶法和酶联免疫法测定细胞上清液 中N0含量 1．1 材料 人脐静脉 内皮细胞 (HUVEC)，美 国 和ET—l含量。HUVEC经过 0．25％胰蛋白酶消化 、 ATCC产品(上海信然生物技术有限公司)；RPMI一 室温条件下 1000rpm离心沉淀 以及生理盐水反 1640培养基、胰蛋白酶(trypsin)(美国Gibco公司)； 复离心洗涤后，收取细胞沉淀并悬浮于生理盐水 优级胎牛血清 (FBS)(杭州 四季青公司)；四甲基偶 中，再用玻璃匀浆器与冰上匀浆 3min．然后采用 氮唑蓝 (nTr)、PBS溶液 、链霉素 (厦 门鹭隆生物 化学 比色法测定 HUVEC总NOS水平 。3种物质 科技有限公司)；烟碱 、d一筒箭毒碱 (美 国 sigma公 含量具体检测步骤参照相关试剂盒说明书。 司；黄芪注射液 (正大青春宝药业公 司 ，批号 ： 1_2．3 统计学处理 实验数据用 表示 ，采用 080508)，总NO试剂盒 (碧云天生物科技公司)； SPSS13．0forwindows统计学软件进行统计分析， 总NOS(南京建成生物工程研究所)；ET一1测定试 P0．05表示差异有显著统计学意义 剂盒 (美 国ADL公司)。