用RAPD技术对湖北钉螺遗传变异的研究.pdfVIP

维普资讯 中国寄生虫病防治杂志 2004年 6月 第 17卷第 3期 ChinJ ParasitDisCon June 2004．Vo1．17， No．3 · 论著 · 用RAPD技术对湖北钉螺遗传变异的研究 刘蓉 ，牛安欧 ，李莉 (华 中科技大学 同济医学院寄生虫学教研室，湖北武汉 430030) 【摘要】 目的 对中国不同自然隔离群的湖北钉螺进行遗传变异研究 ，并为种下分类提供依据。 方法 采用随机扩 增多态性 DNA(RAPD)技术 ，对 中国9省 17地 的湖北钉螺进行 PCR扩增 ，并根据扩增产物琼脂糖凝胶 电泳的带型，计 算各地域株间的遗传距离，根据遗传距离绘制系统进化树。 结果 各地域株标本 PCR产物均呈多念性 ·其中台、闽与 中国大陆其余地域株钉螺遗传距离为 0．1483～0．3102；滇、川两个地域株间为 0．1395，此两株与长江中下游各地域株 遗传距离达 0．1266～0．3102，与闽、台株为 0．1898～0．2235；湖区型与平原水网型湖北钉螺的遗传距离为 0．0589～ 0．1872；山丘型与湖区型及平原水网型之间的遗传距离为 0．1326～o．3102；湖北省内各地域株遗传距离为 0．042】～ 0．2441。 结论 应用 RAPD技术为可将湖北钉螺分为 6类 ：① 闽、台地域株 ；②滇、JIl地域株 ；③湖北荆 门、阳新、武 汉、钟祥、沙市、石首、松滋 (包括松滋河及庙河上下游 的钉螺)．赤壁(车埠)、赣、沪、皖地域株 ；④湖南地域株 ；⑤湖北应城 地域株 ；⑥湖北赤壁 (大 田畈)地域株 。 【关键词】 湖北钉螺 ；遗传变异；RAPD；种株 【中图分类号1 R383．24 【文献标识码】 A 【文章编号1 1001—6627(2004)030136—04 湖北钉螺作为 日本血吸虫的唯一 中间宿主 ，其种 纯度符合要求。 下分类 曾引起较大争议 ，传统分类学方法主要根据钉 3 RAPD-PCR扩增 螺的形态特征和地理分布分类 ，其局限性 日显突出，而 3．1 引物 参考Webster 、Sire 等所用引物，经预 分子生物学的发展为钉螺的遗传变异的研究奠定了基 试验从 11条引物 中筛选 出扩增效果较好的6条 10碱 础。20世纪 90年代初 出现 的随机扩增多态性 DNA 基 引物 ，碱基组成及 G+C含量 的百分 比见表 1。 (Random amplifiedpolymorphicDNA，RAPD)技术 ， 表 1 RAPD-PCR引物 无需预知靶基因序列 ，仅以单条较短的随机引物 ，在低 Table 1 TheprimersofRAPD-PCR 严格度条件下便可检测整个基因组多态位点，具简单 、 快速的优点 。本研究采用 RAPD技术对 中国大陆及 台湾不 同地理隔离群 的湖北钉螺进行研究，并根据 RAPD扩增 图谱计算湖北钉螺不同 自然隔离群间的遗 传距离 ，绘制系统进化树 以了解其遗传变异情况 ，为中 国湖北钉螺 的分类提供参考依据。 材料和方法 3．2 RAPD-PCR扩增 参照 Williams等 一及 welsh 1 标本 的收集 等 的方法 ，经预实验进行适 当调整 。总反应体系 25 l：5～ 10ng模 板 DNA，1×Bu