用包皮成纤维细胞培养弓形虫速殖子的研究.pdfVIP

维普资讯 中国寄生虫病防治杂志 2004年 1O月 第 17卷第 5期 · 268 · ChinJ ParasitDisCon October2004， Vo1．17，No．5 · 论著 · 用包皮成纤维细胞培养弓形虫速殖子的研究 许丽芳 ，杨秋林 ，张愉快 ，梁瑜 ，伍和平 (南华大学医学院诊断学教研室，湖南衡阳421001) 【摘要 】 目的 建立用包皮成纤维细胞 (Humanforeskinfibroblasts，HFF)培养 弓形虫速殖子 的方法 。 方法 将包 皮环切术切下的包皮在含青 、链霉素的 Hank’s液 中充分洗涤后，用眼科剪子剪成 0．5cm。的组织小块 ，移人培养瓶 中培 养，待HFF细胞长满瓶底后 ，用胰酶消化并将其接种到培养皿中的盖玻片上培养 ，HFF长满盖玻片后 ，用 弓形虫速殖子 感染 HFF，镜下观察并于 l、2．5、4、5．5、10、23和 32h取出其中一皿中的盖玻片，经姬 氏染色 、二 甲苯透明后 ，镜下观察 速殖子生长情况。 结果 弓形虫速殖子大多在感染后 3h～5h侵入 HFF，32h左右，假包囊破裂，释放出虫体。 结论 成功建立 了用 HFF培养 弓形虫的方法 。 【关键词】 弓形虫 ；包皮成纤维细胞 ；细胞培养 【中图分类号】 R382．5 【文献标识码】 A 【文章编号】 1001—6627(2004)05—0268—02 用于培养 弓形虫的宿主细胞很多_1]，原代细胞刚 23和 31h分别取 出培养皿 中的盖玻片，在 Hank’液 刚离体 ，在一定程度上能反映体 内状态 ，适用于研究 中洗 2次，每次 30S，姬 氏染色 ，二 甲苯透 明后 ，镜下观 弓形虫侵入细胞及免疫逃避 的机制 ，也利于抗 弓形虫 察照像 ，并连续观察速殖子在 HFF中的生长情况 。 药物的筛选。国外现广泛应用包皮成纤维细胞 (Hu— 结 果 manforeskin fibroblasts，HFF)开 展 弓形 虫 的研 究_3，国内尚缺这一方面的工作 。为开展上述研究 ，作 l HFF细胞培养 者等成功建立 了用 HFF培养 弓形虫方法 。 培养 7d左右在组织块 的四周长 出细胞 ，如火焰 状 ，有些组织块长 出上皮细胞 ，有些组织块长出 HFF， 材料与方法 HFF的生长速度超过上皮细胞 ，20～30d后 HFF长 1 弓形虫 满瓶底 ，可进行第 1次传代 。 弓形虫 RH株 由上海第二医科大学杨惠珍教授 2 弓形虫感染 HFF情况 惠赠。 图 1为弓形虫速殖子感染的 HFF细胞。将 弓形 2 HFF培养 虫速殖子加到 HFF培养皿 中后 ，可见 弓形虫主动向 包皮取 自门诊行包皮环切术 的患者 ，HFF培养参 HFF移动，以其顶端吸住 HFF，或 以虫体侧面紧贴 照文献-14]方法进行 。当HFF细胞长满培养瓶底后 ， HFF并沿细胞表面移动 ，然后再以顶端定位于细胞表 用 0．25％胰酶消化 ，显微镜下观察 ，当胞质 回缩 ，细胞 面 (图2 )，约 3h～5h虫体侵入 HFF细胞 ，此时可 间隙开始增大时，终止消化 ，用吸管吹下贴壁细胞 ，制 见含单个虫体的纳虫空泡 (图