突脐孢属Brnl基因核苷酸序列比较及系统发育研究.pdfVIP

维普资讯 菌 物 学 报 23(4)：480~486，2004 Mycosystema 突脐孢属BrnI基因核苷酸序列比较及系统发育研究 孙广宇 张雅梅 张 荣 (西北农林科技大学植保学院 陕西杨凌 7l2lO0) 摘 要：对所有供试突脐孢菌株的Brnl基因 (1，3，8一三羟基萘还原酶基因)扩增均获得PCR 产物。序列比较表明：在种内各菌株间没有核苷酸序列长度变化，存在核苷酸序列简单代 换；在种间核苷酸序列长度有变化，核苷酸的缺失或插入发生在内含子区；所有菌株编码 区核苷酸序列长度相同；在种内水平氨基酸序列没有差别，显示出高度的保守性。利用最 大简约法 (Maximum parsimony)和邻近结合法 (Neighbor-joining)构建系统发育树，两 个系统发育树的拓扑结构相似，不同种在不同的分支上。Brnl基因适合突脐孢属种级水平 的分子系统学研究。 关键词：系统发育树；离蠕孢属；序列分析 中图分类号：Q939．97 文献标识码：A 文章编号：1672—6472(2004)04—0480。0486 突脐孢属Exserohilum由LeonardSuggs创建，目前己报道的种约25种 (Sivanesan，1987， 1993；Alcorn．1988；Suneta1．，1997)。该属主要依据分生孢子的形态学特征，如分生孢子的大 小、颜色、脐点形状和长短、隔膜的数目、加厚与否等进行分类和鉴定。由于分生孢子的形 态学特征易于受到外界条件的影响而发生变化，如在不同的寄主和基质上、在不同培养条件 下形态有较大差异，基于不同条件下的形态学特征描述的分类单位常引发一些争议。对一些 变异较大的种的界限虽经过多年的研究和争论，仍没有在分类学家之间取得一致的看法。与 匮乏且不稳定的形态学特征相比，核苷酸序列可以提供丰富的能够反映真菌进化历史的性状， 因而被广泛用于许多真菌的系统学研究(Berbeeeta1．，1999；Claudiaeta1．，1995)。 黑色素为真菌的次生代谢物，普遍存在于暗色丝孢菌中。它们对于延长真菌的存活时间 和生存能力具有重要的意义 (Sussman，1968)。Shimizu等 (1997)从玉米小斑离蠕孢菌上克 隆出参与黑色素生物合成的一个基因—— ，(1，3，8．三羟基萘还原酶基因)。该基因编码267 个氨基酸，含有3个外显子，2个内含子，全长900个左右核苷酸。外显子高度保守，内含子长 度和核苷酸种类具有一定的变异。利用Brn1基因序列对离蠕孢属 (Bipolaris)种的系统学研 究表明：不同种之间的差异明显，种内差异较小，适合于进行离蠕孢属种间分子系统学和种 的界定研究 (Shimizueta1．，1998)。Sun等利用Brn1的序列分析对弯孢属膝曲群种的研究显示 该基因亦适合区分弯孢属相似种 (Suneta1．，2003)。 本研究拟通过对突脐孢属不同种BrnI基因的序列分析，探讨利用该基因进行突脐孢属种 间系统演化研究的可能性。 国家 自然科学基金资助项 目 (项 目编号 ’通讯作者E—mail：sunguang@public．xa．811．cn 收原稿 日期：2004—03—08，收修改稿 日期：2004—05．20 维普资讯 4期 孙广宇等：突脐孢属Brn1基因核苷酸序列比较及系统发育研究 481 1材料与方法 1．1菌株的来源 供试菌种部分来自本研究室保藏菌种，部分菌种由英国国际真菌研究所B．C．Sutton博士 (IMI)、澳大利亚基础工业部植物病理学研究所J．C．Alcorn博士、山东农业大学张天宇教 授和河北农业大学董金皋教授惠赠 (表 1)。 表 1供试菌株及其来源 Table1SourcesofExserohilumisolatestested 1 菌种在PDA斜面培养基上培养3-5d，从菌落边缘挑取适量的菌丝，转入