百合MDHAR基因的克隆与表达分析.pdfVIP

第46卷 第 9期 林 业 科 学 Vo1．46．No．9 2010年 9月 SCIENTIA SILVAE SINICAE Sep．，2010 百合MDHAR基 因的克隆与表达分析 陈 莉 辛海波 李晓艳 李晓昕 义鸣放 (中国农业大学农学与生物技术学 院 北京 100193) 关键词 ： 铁炮百合 ；MDHAR；克隆；表达 中图分类号：$718．46；Q943．2 文献标识码 ：A 文章编号：1001～7488(2010)09—0178—04 CloningandExpressionAnalysisofMDHAR from Lilium longiflorum ChenLi Xin Haibo LiXiaoyan LiXiaoxin YiMingfang (CollegeofAgricultureandBiotechnology，ChinaAgriculturalUniversity Beijing100193) Abstract： Aall—lengthcDNAofLlMDHARgenewasclonedfromLilium longfliorum CV． W‘hiteHeaven’byRACE． Thegeneconsistedof1502 bp encodingaprotein of434 aminoacids．ThesequencingindicatedthattheLlMDHAR gene sharedhighlyhomologywithotherplants．RT—PCR analysisshowedthatexpressionofLlMDHAR genecouldbedetectedin theroot，bulb andleaf，andtherelativehighexpression occurred intherootandleaf．UnderH2O2stress，theexpression ofL1MDHAR genewasincreasedwiththeraisingofH202concentration． Keywords： Liliumlongfliorum；monodehydr0ascorbatereductasegene(MDHAR)；cloning；expression 抗坏血酸 (aseorbieacid，AsA)作为植物细胞 内 苗。温度 (25±2)℃；光照时间为 14h·d～。 重要 的自由基清除剂 ，是通过参与一系列 的氧化还 1．2 RNA的提取及逆转录反应 取百合组培苗直 原反应而发挥抗氧化剂的功能。单脱氢抗坏血酸还 径 5mm 的小鳞茎及生长 30天 的根、叶片，总 RNA 原酶 (monodehydr0ascorbatereductase，MDHAR)在抗 的提取采用 Trizol法。所提取的RNA进行 1％琼脂 坏血酸 一谷胱甘肽循环中，可以将氧化型抗坏血酸 糖凝胶 电泳 ，然后进行逆转录。 (MDHA)还原为还原型抗坏血酸 (AsA)，在维持植 1．3 保守片段的克隆 根据 GenBank核酸数据库 物体 内抗坏血酸的正常代谢和植物体氧化还原平衡 中报 道 的 拟 南 芥 (Arabidopsisthaliana)(NM一 方面起着重要作用 (Cheneta1．，2003；2005)。 12044)、白菜 (Brassica rapa subsp．pekinensis) 百合 (Lilium)作为主要 的切花和盆花材料 ，在 (AY039786)、水稻 (Oryzasativa)(D85764)、冰叶 日 国内外花卉市场上 占有重要地位 。百合性喜冷凉湿 中花 (Mesembryanthemum crystalli