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第32卷，第12期 光谱学与光谱分析 201 and 2年12月 SpectroscopySpectralAnalysis 线性探测低浓度物质的高灵敏时间分辨CARS方法 荆利青，尹 君，侯国辉，刘 伟，林子扬，牛憨笨’ 深圳大学光电工程学院，光电子器件与系统(教育部／广东省)重点实验室，广东深圳518060 摘要对时间分辨相干反斯托克斯拉曼散射(T-a～RS)方法详细地进行理论分析，搭建了时间分辨相干反 斯托克斯拉曼散射实验系统，从理论和实验上验证了T-CARS信号的强度与溶液浓度的关系。以元水乙醇 927 和蒸馏水的混合溶液作为样品，测得在波数为2 ClTI--1(C—H)处的信号强度随溶液浓度的变化关系。结 果表明，当溶液浓度大于35％时，T-CARS信号强度与溶液浓度成平方关系；而当溶液浓度小于20％时，T_ CARS信号强度与溶液浓度成线性关系，实验结果与理论分析相吻合。该结论纠正了以前人类对CARS过 程的错误认识，有助于人类对CARS过程的进一步了解和应用。而在低浓度时的线性关系表明时间分辨 CARS可对低浓度样品尤其是生物样品进行分子识别和线性定量探测，这对分析生物样品和其它低浓度物 质具有重要的应用价值。 关键词线性；时间分辨；相干反斯托克斯拉曼散射；浓度 中图分类号：0433．4文献标识码：A 引 言 光源探测生物样品时，由于水溶液的环境会产生相当大的非 共振背景，使得这一问题显得更突出。因此，如何消除非共 Anti—StokesRaman 相干反斯托克斯拉曼散射(coherent 振背景成为CARS光谱探测和显微成像技术中必须考虑的 一个重要问题。目前普遍采用的抑制NRB噪声的方法有时 scattering，CARS)显微成像技术是一种基于四波混频非线性 光学过程的非侵入式显微成像技术。中心频率分别为wp和 间分辨探测(time-resolved 嫡的泵浦光(Ep)和斯托克斯光(Es)同时入射到待测样品中(polarization-sensitive)E61、相位控制(phasecontr01)和外差干 时，若入射光场的电场分量EP和ES之间的频差与分子的振 动频率n相等(n—c￡JP—c￡，s)时，物质分子的固有振动得到共 振增强，利用中心频率为州的探测光(西)对此共振信息进 时间特性能够有效地抑制非共振背景，如图2所示，通过调 行探测，在满足相位匹配的条件下，则可获得频率为OJAS=节作为探测光的窄线宽激光脉冲和泵浦光及斯托克斯光之间 州+n的反斯托克斯信号，如图1所示。CARS信号不但具的时间延迟r实现T_CARS方法。对于提高系统的探测灵敏 有很好的方向性和较自发拉曼高六个数量级以上的强度，而 度以及实现突破光学衍射极限限制的非标记CARS显微成 且可以获取待测样品的分子组成和其空间分布信息。因此， 像都具有重要的研究意义。 CARS光谱探测和显微成像技术以其高灵敏度、高光谱分辨 但是目前CARS的应用都只是处于定性分析，还未用于 率及三维成像能力，在分子生物学、细胞生物学、医药学、 对样品的定量分析，限制了分析CARS过程的灵敏度以及超 生命科学、材料科学、化学等众多研究领域中具有广泛的应 分辨能力。定量分析涉及到信号强度与浓度及环境等因素的 用价值，目前已取得许多引人注目的研究成果[1≈]。 关系，对深入了解样品具有很重要的意义。由于具有时间分 但是在共振嘲信号的产生的过程中，始终伴随着 CARS共振信号的强非共振背景(non-resonancebackground， NRB)，使嘲共振信号谱相对自发拉曼谱发生扭曲，甚过程是否具有时间分辨，它们与浓度的关系是一致的。通常 至会淹没共振信号，严重限制了系统的探测灵敏度及光谱分 认为