紫花苜蓿高频再生组织培养体系建立.pdfVIP

维普资讯 2005年 2月 重庆大学学报 (自然科学版) Feb．2o05 第28卷第 2期 JournalofChongqingUniversity(NQtumlScienceEdition) Vo1．28 No．2 文章编号 ：1000—582X(2005)02—0132—05 紫花苜蓿高频再生组织培养体系建立 王 凭 青 ，周 兴 龙 ，杨 青 )11，吴 明生 ，谢 伟 伟 (1．重庆大学 生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室，重庆 400030；2．中国农业科学院畜牧研究所，北京 100094) 摘 要 ：以8个品种的无菌实生苗子叶和下胚轴为外植体，研究了4种不 同培养程序及基因型对紫 花苜蓿胚性愈伤组织、胚状体诱导及成苗移栽的影响。结果显示：4种培养程序对苜蓿的出愈率影响差 别不大，但不同培养程序对苜蓿的分化率和成苗率影响差异显著，其中SHK—MSO—MSO在分化率和 出苗率上表现较佳；另外，不同基因型在苜蓿出愈率和成苗率上反应不显著，但在分化率上反应显著，其 中中苜一号，草原2号和保定苜蓿表现较佳。 关键词 ：紫花苜蓿；组织培养；愈伤组织；胚状体 中图分类号 ：S188 文献标识码 ：A 紫花苜蓿 (MedicagosativaL．)属多年生豆科植 培养48h，种子开始萌发 (见图1)，然后 16h光照，8h 物，为重要的高蛋白质饲料牧草，被誉为 “牧草之王”， 黑暗培养3—5d后 ，长出子叶(见 图2)，切取苜蓿新 在畜牧业生产中占有重要的地位 J。近年来，由于我 生苗的子叶和下胚轴，用于诱导愈伤组织 引。 国生态环境遭到破坏 ，草场盐碱化程度加重 ，造成产草 量不足 ，影响了畜牧业的发展。而恢复草场生态环境 ， 投资大，周期长，这就需要考虑培育抗虫 ，抗病，抗逆的 苜蓿品种 】。传统的遗传育种见效慢 ，转基因技术则 是一项行之有效的手段，然而紫花苜蓿作为基因转化 的受体，其组织培养体系还存在再生率低、培养的周 期长等缺点，因此需要建立紫花苜蓿高频再生组织培 养体系，为今后通过基因转化改 良紫花苜蓿性状和实 现其产业化作准备 。 图 1 种子萌发 1 材料与方法 1．1 试验材料 供试苜蓿品种为阿尔冈金，中苜一号 ，草原 2号 ， WL232，WL323，DEFI，Sitel，保定苜蓿。 1．2 试验方法 1．2．1 外植体的准备 将苜蓿种子用 75％酒精浸泡 10min，再用0．1％ HgCI2消毒 8～15min，无菌水冲洗 5次，每次 5min 后 ，将种子放到装有无菌水的三角瓶中浸泡 2h，待种 图2 长 出子叶 子膨胀后 ，将种子接种到 1／2MS培养基上，27℃黑暗 · 收稿 日期 ：2004—10—20 基金项 目：教育部重点科技基金资助项 目(01145和02156)；国家 “863”重大项 目(2002AA241101)；重庆市应用基础研究科 学基金资助项 目(7900) 作者简介：王凭青(1962一)，男，湖北鄂州人，重庆大学副教授，博士，从事生物工程与农业生物技术研究工作。 维普资讯 第28卷第2期 王凭青 等： 紫花苜蓿高频再生组织培养体系建立 133 1．2．2 培养基及培养程序 SHK，MSO培养基上，27℃黑暗条件下，诱导体胚分 本实验在借鉴前人工作的基础上，共设计了4种 化。连续经过多次继代培养 ，淘汰褐色的愈伤，筛选出 培养程序 ，进行愈伤组织和胚状体的诱导及植株成苗 呈黄 白色、浆糊状、并镶嵌有绿