邻羟基苯基灾光酮荧光光度法测定牛血清白蛋白.pdfVIP

第28卷，第6期 2OO and 8年6月’ SpectroscopySpectralAnalysis June，2008 邻羟基苯基荧光酮荧光光度法测定牛血清白蛋白 黄应平1，顾 彦2，方艳芬1，刘玉良1，朱圣姬1，罗光富1 1．三峡大学Alan 443002 G．Macdia册id再生能源研究所，湖北宜昌 2．三峡大学机械与材料学院，湖北宜昌 443002 7．90 摘要研究了邻羟基苯基荧光酮(0_HPF)荧光光度法测定牛血清白蛋白(BSA)的反应条件，在pH 的BR缓冲溶液中，邻羟基苯基荧光酮(矿HPF)与BSA作用形成稳定的结合物，导致体系荧光猝灭，依据 其荧光猝灭程度与外加BSA量的关系而建立定量测定BsA的方法。该方法具有良好的选择性和稳定性，由 于采用二元体系，实验操作简单，干扰少，灵敏度较高，测定BSA线性范围为o．028～13．65耻g·mL～，方 法测定BsA回归方程为△F=431．51c(10-7n101·L-1)+457．78，相关系数，．一o．997。测定方法中重金属 作用荧光猝灭常数的测定及热力学常数计算，讨论了矿HPF与BsA的作用机理，表明o-HPF与BsA作用 方式主要为静电引力的非共价作用力，BSA对0-HPF荧光猝灭为分子间形成了结合物而引起的静态猝灭。 关键词邻羟基苯基荧光酮；牛血清白蛋白；荧光光度法 中图分类号：()657．3文献标识码：A 文章编号：1000-0593(2008)06—1336一04 用[4一]，其作为染料探针试剂用于蛋白质的测定报道不 引 言 多[6’7]，由于其一般采用三元体系，其测定方法较为复杂。 本文研究了邻羟基苯基荧光酮(o_HPF)荧光光度法测定牛血 蛋白质研究对生命科学、生物化学、临床医学等都有十 清白蛋白(BsA)的反应条件，在pH7．90的导R缓冲溶液 分重要的意义，通过研究蛋白质与探针有机小分子的作用方 中，0_HPF与BsA作用形成稳定的结合物，导致体系荧光猝 式，可以了解其结构与功能之间的关系，揭示生命现象的奥 灭，据此方法可定量测定微量蛋白质，该方法具有良好的选 秘。而蛋白质的定量分析是生化、药物、食品及临床分析最 择性和稳定性，实验操作简单，干扰少，灵敏度高，测定牛 常涉及的内容，也是临床检验中诊断疾病及检查疾病治疗康 复情况的重要指标，又是许多生化药物分离提纯和质量检验 D_HPF与BsA作用荧光猝灭常数的测定及热力学常数计算， 中最常用的手段，某些生命物质如酶、多肽、蛋白质及蛋白 质激素的分离纯化更是离不开蛋白质的定量测定。因此蛋白 方式主要为静电引力的非共价作用力。 质的定量测定在生命科学、临床医学和化学研究中占有十分 重要的地位uJ。 1实验部分 蛋白质的定量分析方法有很多，从最早的浊度法、凯氏 定氮法，到目前研究最多、应用最广、操作较为简便的分子 1．1主要仪器和试剂 光谱分析法，还有新发展起来的共振瑞利散射法、高效液相 色谱法、毛细管电泳分析法等，这些方法各有优点[2]。在分 特勒一托利多仪器上海有限公司)；n}85型超级恒温器(上海 子光谱分析法中，光度法应用广泛，荧光法灵敏度比分光光 第二五金厂)。 度法高，目前荧光光度法用于蛋白质测定主要是外源荧光法 mo卜 (荧光探针法)，其主要应用的荧光探针试剂包括染料探针和