低功率微波耦合溶剂相酶促酯化反应及其荧光光谱的变化.pdfVIP

第29卷，第2期 光谱学与光谱分析 200 and 9年2月 SpectroscopySpectralAnalysis February，2009 低功率微波耦合溶剂相酶促酯化反应及其荧光光谱的变化 闵 瑞1，方 云1，夏咏梅1’弘 1．江南大学化学与材料工程学院，江苏无锡214122 2．江南大学食品科学与技术国家莺点实验室，江苏无锡214122 摘要 以溶剂相脂肪酶I。RI催化辛酸和丁醇的酯化反应体系为对象，将反应体系中各组分分别在低功率 微波辐射和常规加热下对I。RI作用后，用荧光发射光谱分级逐步研究I。Rl在有机溶剂和水环境中的荧光光 谱变化。微波辐射和常规加热在所有实验条件下均增强LRl的荧光强度而没有导致最大发射波长位移。在 微波辐射能够提高反应初速度的范围内，当I。RI与有机分子共热后，微波辐射更有利于LRI蛋白质分子在 P 水中的裸露。不同logP溶剂的反应体系对酶构象的影响主要表现为溶剂对其的影响。反应初速度对log P 的变化规律与水相I。RI蛋白质的荧光强度对logP的变化接近，而与溶剂相LRI蛋白质的荧光强度对log 的变化规律之间基本无共同之处。 关键词脂肪酶；构象；微波；荧光；非热效应；溶剂 中图分类号：Q586文献标识码：A 程度上可揭示酶分子肽链的伸展及构象变化，特别是揭示酶 引 言 蛋白分子裸露程度的变化；而酶蛋白分子的适度裸露对酶与 底物的契合是很重要的，适度的酶蛋白分子裸露有利于酶蛋 微波辐射可以用来消解蛋白质，也可以用来加速酶催化 白分子更好地与底物结合，从而加快反应速度；过度的裸露 反应，而后者自然是在不损伤酶的一级结构的低功率辐射下 使酶的结构过于松散，可能会破坏酶特有的疏水袋结构，有 进行的。在酶催化反应中，抑制剂【1]、溶剂m]、电磁场[7-叼利于竞争性副反应的发生。 或者金属离子及配合物[10]对酶的构象都会产生影响，从而 此外，脂肪酶的催化反应是发生在油水界面上的，所以 影响酶的催化活性。研究微波辐射对于酶构象的影响，将有 很有可能脂肪酶的蛋白质分子伸展也同时涉及溶剂相和水 助于研究微波在微波耦合酶促反应中的非热效应，但是微波 相；尤其是对共价固定化脂肪酶而言，其蛋白质分子伸展还 辐射过程中酶的光谱变化以及微波对于酶构象的影响均少见 受到该共价键合的制约。另一方面，蛋白质分子在330和 RM 报道。我们的前期工作表明[11|，脂肪酶LipozymeIM(固 350啪处的荧光强度变化分别可以用来考察酶蛋白中色氨 定化(Rhizomucor 酸残基在溶剂以及水相中的裸露程度，而蛋白质水溶液在 miehci)Lipase，LRI)在溶剂相中20～65 310 ℃下催化酯化辛酸和丁醇时，微波辐射可以提高反应的初速 nlTl处的荧光强度变化可以用来考察酶蛋白中疏水部分 度；进一步研究表明，辛酸对酶有一定的抑制作用，而且微 色氨酸残基的裸露程度变化。因而这些荧光强度变化也可以 波辐射可以增强醇与酶的亲和力，但是对微波辐射下LRI的 用于判别酶蛋白的裸露程度变化，在一定程度上反映酶蛋白 构象变化不甚明了。 的构象是否发