膜生物学与生物分子结构功能研究.docVIP

重庆理工大学科研创新团队 中期检查报告 （2011年5月-2012年12月） 团队wannengw@cqut.edu.cn 填 报 日 期： 2013-4-26 重庆理工大学 二O一三年制 简表 研究方向 膜生物学与生物分子结构功能研究 依托硕士点 微生物与生化药学 依托科研基地 重庆市制药工程技术中心 依托学科专业 生物化学与分子生物学研究工作完成情况 1、2011年5月-2012年12月研究计划（任务书中所定内容）。 2010.11－2011.12细胞膜及膜蛋白具有重要的生理功能和特点，它在信号传导、物质跨膜转运、病原寄主的识别、免疫抗原性、药物的作用靶点等方面发挥了关键的作用，生命的本质在于其组成分子的结构和功能，本创新团队主要开展急性肺损伤过程中膜蛋白结构与功能变化情况的研究工作，也会涉及到细菌光合作用膜蛋白的表达及功能，以及肿瘤转移的相关膜蛋白的分子行为。 主要研究重点是：正常动物模型中膜蛋白SP在膜中的结构定位；分析正常动物模型中SP与膜磷脂的相互作用关系；用内毒素-脂多糖(LPS)建立急性肺损伤(ALI)模型；分析ALI动物模型中S与膜磷脂的相互作用关系；对SP膜外肽端进行疏水进化，形成SPm;分析SPm与膜磷脂的相互作用关系及稳定性；利用免疫沉淀法等研究ALI动物模型中SPm在膜上的定位；研究SPm在ALI动物模型中对膜功能的修复作用及效果评价。通过上述研究工作，初步明确与急性肺损伤相关性极高的功能膜蛋白SP的作用及变化特性，并将其用于急性肺损伤动物治疗试验，评价其膜功能的修复效果，为实际应用治疗提供相关的理论和技术支持。 2012.1－2012.12 在膜生物学与糖生物学相结合方面也开展了一些研究工作，抵抗疾病的糖药物来源很广，其中大多数是天然存在的化合物，例如多糖类的糖苷类。由于多数以糖类为基础的药物的作用位点是在细胞表面，本团队在功能多糖与膜蛋白分子识别方面作一定的研究。 2、2011年5月-2012年12月研究计划完成情况（对照任务书中所定内容进行说明）。 本创新团队膜生物学方向课题组将膜蛋白与急性肺损伤结合起来，开展了以下研究工作： ① 通过免疫荧光技术确定SP-B蛋白在肺组织中定位。利用基因技术完成从RNA提取到T-SP-B与pEGFP-N2-SP-B重组质粒的构建，通过脂质体转染至CCL-149与A549细胞系，确定SP-B在细胞中的定位。 ② 通过生物信息学工具对模拟肽设计、筛选，并采用标准的Fmoc固相化学合成法合成。 ③ 利用脂质体构建模拟膜，采用Wilhelmy式膜天平初步测定模拟肽体外活性。 ④ 利用拉曼光谱法测定模拟肽对脂质链的构象的变化。分析多肽是否会促进脂质结构的有序性降低以及增强膜的流动性。 ⑤ 建立大鼠离体肺灌洗模型，通过气管滴注验证模拟肽制剂对大鼠离体肺顺应性的作用。 通过实验，获得了以下的研究结果，具体如下： ① 利用免疫荧光确定了SP-B蛋白在肺组织中定位。成功构建了T-SP-B与pEGFP-N2-SP-B重组质粒，测序结果正确。质粒转染结果显示SP-B在A549细胞系中主要定位于细胞质中，而在CCL-149细胞系中主要定位于细胞核与细胞膜上。 ② 通过生物信息学工具设计、筛选出了模拟肽KAAVV。委托吉尔生化公司合成多肽，HPLC结果显示纯度达到98.6%，质谱分子量结果与理论值一致。 ③ 成功构建脂质体模拟膜，初步体外活性测定显示其能够有效降低气液表面张力。 ④ 拉曼光谱分析结果显示在加入多肽后，使DPPC与DPPG的C-C骨架有序性构象降低，链间无序性增强。C-H的伸缩振动表明，加入多肽后增强双层膜的流动性，显示出了SP-B在PS中的所起到的作用。 ⑤ 离体静态肺顺应性测定结果显示模拟肽制剂能够明显提高肺顺应性。 这些研究成果为进一步深化研究开发急性肺损伤的高效替补治疗剂奠定了良好的基础，本团队也准备在此基础上深入实验，对其作用进行评价。并已成功投稿“疏水性肺表面活性蛋白SP-B结构类似物的研究进展”至华西药学杂志，已录用待发表，SCI研究论文正在投稿中。 生物代谢调控方向课题组利用均匀设计的方法，进行试验方案设计，并对试验生产的白酒成份进行分析、打分，利用SPSS软件推导其数学模型反应方程式，确定出最佳的原料配比。针对多粮酒生产的特点对发酵工艺参数进行了优化，对发酵过程中微生物进行分离、鉴定，明确了微生物的动态变化，并在实际生产中进行调控。并利用化工原理建立蒸馏模型，通过蒸馏模型调控提高出酒率。还利用超声波等物理因素研究了快速陈化方法，分析其对酒微量成分的酒体质量的影响，并建立了多粮型小曲固态法调味白酒质量标准。 主要创新在于利用均匀设计方法确定原料品种及其最佳配比组成比例