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第33卷第4期 五 工 Vo1.33Na4
2010年 4月 Apt. 2010
夫西地酸产生菌原生质体制备及再生
苏彩云,张 佳,王组}厶,张春珍,代明伟,任志红,朱研研
(华北制药集团新药研究开发有限责任公司,河北 石家庄 050015)
[摘 要]以夫西地酸产生菌fa挣. 为出发菌,开展了原生质体制备和再生条件的研究,实现了原生质体的制备和再生。主要
从菌丝的培养条件、酶的浓度及种类、高渗液等几方面探讨了原生质体的制备及再生。
[关键词]夫西地酸;原生质体;再生
[中图分类号]Q93—3 [文献标识码]A [文章编号】1003—5095(2010)04—0035—03
夫西地酸钠 (SodiumFusidate,Fusidin,褐霉 液体培养基:M葡萄糖 2.5%,蛋 白胨 0.5%,酵母
酸,商品名立思丁)是夫西地酸 (FusidicAcid)的钠 粉 0.2%,磷酸二氢钾 0.1%,硫酸镁 0.05%,碳酸钙
盐,属梭链孢酸类抗生素。夫西地酸 由丹麦利奥制药 0.25%,pH6.0;M2蔗糖 2.5%,蛋白胨 0.5%,酵母粉
公 司 于 1962年 首 次 从 脂 球 真 菌 (Fusidium 0.2%,磷酸二氢钾 0.1%,硫酸镁 0.05%,碳酸钙
coccineumfungus)中提取出来。抗菌机理是通过抑 0.25%,pH6.0;M3蔗糖 2.0%,玉米浆 3%,碳酸钙
制核糖体的易位来干扰延长因子 G,从而阻碍细菌 0.25%,pH 5.8。
蛋白的合成。这种独特的作用机理避免了与其他抗菌 高渗培养基:PDA+3.9%NaC1。
药物的交叉耐药性。夫西地酸在国外被广泛使用了四 1.2 原生质体的制备
十多年,目前却仍对 95%多重耐甲氧西林金葡 RSA) 取新培养的夫西地酸产生菌斜面,加入无菌水,
菌株保持较强的抗菌活性和很低的耐药率,使夫西地 刮取适量孢子液,接种于液体培养基,28℃振荡培养
酸在抗感染领域赢得独特的地位[1],所 以越来越受到 一 定时问后,收集菌丝。菌丝用无菌水洗涤干净,取一
人们的关注 ,现 已成为治疗MRSA的一种新选择。 定的菌丝悬于高渗缓冲液中,加入破壁酶液,30℃振
目前关于夫西地酸产生菌微生物育种研究的报 荡处理,镜检观察原生质体形成情况。如果大部分菌
道较少,国内有一篇关于夫西地酸产生菌鉴定的文 丝已断裂且有大量的原生质体释放,将原生质体置于
献r翻,目前清华大学国际技术转移中心报道罐上效价 冰上,用 200目筛网加 400目滤布除去残留的菌丝
达到 3.8g/L,发酵时间是 190h。在微生物育种中经 体,滤过的原生质体经洗涤离心后,悬浮于适当体积
常采用原生质体诱变、融合、原生质体介导的转化等 的高渗溶液中。
手段来提高菌种 的生产能力 4l],而优质 的原生质体 1.3 原生质体的再生
则是实现上述工作的基础。因此,提高原生质体的形 取原生质体滤液 lmL,加入到培养皿中,倒入
成及再生率是十分重要的。 高渗培养基,轻轻摇匀。另取lmL原生质体滤液加 9mL
1 材料和方法 无菌水,32℃保温 32min,然后倒入正常培养基,
1.1 菌种和试齐0 轻轻摇匀,28℃培养。2~5d后分别计算菌落数。
夫西地酸产生菌 fa ∞;纤维素酶和蜗牛酶,北 再 生率 =
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