雌二醇促进正常宫颈上皮永生化细胞系End1／E6E7增殖的研究.pdfVIP

维普资讯 第26卷第4期 大连 医科 大 学 学报 VOI．26No．4 2004年 l2月 JournalofDalianMedicalUniversity Dee．2oo4 雌二醇促进正常宫颈上皮永生化 细胞系 Endl／E6E7增殖的研究 商宇红 ，白丽霞2，李小平2，魏丽惠2 (1．大连医科大学 第一临床学院妇产科，辽宁 大连 116011；2．北京大学 人民医院妇产科，北京 1ooo44) 摘要：[目的]研究在 17一B—E2作用下正常宫颈上皮永生化细胞 Endl／E6E7的生长增殖和 HPV16／E6E7基因、ERB表达的变化，探讨雌激素及HPV与ERB在宫颈上皮病变发展过程中的作 用。[方法]选取 ERa(一)／ERB(+)的正常宫颈上皮永生化细胞系Endl／E6E7细胞，应用 MTT 比色实验及流式细胞术研究 17一B—E2对其生长与增殖的调控作用；应用 RT—PCR方法半定量 研究17一口一E2对该细胞中HPV16／E6E7基因及ERp基因表达的影响。[结果]随 17一p—E2浓 度增加，倍增时间缩短，MTT吸光度值增高(P=0．045)，细胞周期 G0、Gl期比例下降，G2、M及 S 期比例上升(P=0．002)；HPV16／E6E7mRNA表达增强(P=0．019)；ERBmRNA表达无明显改 变(P=1．00)。[结论]雌激素可能通过ERB以外的途径促进 HPV16／E6E7基因的表达，进而促进 永生化宫颈上皮的增殖生长。 关键词：雌激素受体；人乳头状瘤病毒；宫颈上皮永生化细胞 中图分类号：R7ll 文献标识码：A 文章编号：167l一7295(2004)04—0247—40 宫颈癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤之 1 材料和方法 一 。 人乳头状瘤病毒(HPV)特别是高危型HPV感 染是引起宫颈癌变的首要因素，但尚需与其他因素 1、1 实验材料 协同作用，才能导致宫颈恶性病变的发生。临床资 KER—SFM无血清培养液 (美国GIBCO公 料提示，HPV感染与雌激素(E2)及其受体在宫颈病 司)、17一B一雌二醇(美国Sigma公司)、Trizol试剂 变的发生发展中可能存在某些协同作用。近年来研 盒(美国GIBCO公司)、RNA酶(美国Sigma公司)、 究多认为 E2可促进宫颈癌组织及细胞系中雌激素 逆转录酶 M—MLV(美国Promega公司)、Taq酶 受体 a亚型(ERa)及HPV的表达，加速宫颈癌细胞 (美国Promega公司)。BB5060型细胞培养箱(德国 系的增殖生长 1 。但对于正常宫颈上皮细胞及雌 Heraeus公司)、分光光度计(英国Cambridge公司)、 激素受体p亚型(ERp)的作用则研究较少。本课题 紫外分光光度仪(Phamacia公司)、FACSort流式细 通过细胞生长曲线、MTT比色实验、流式细胞术等 胞仪(美国BectonDickinson公司)。 方法研究雌激素对ERa(一)／ERB(+)的正常宫颈 1．2 实验方法 上皮永生化细胞系Endl／E6E7细胞增殖生长的调 1．2．1 实验用细胞系：Endl／E6E7细胞系：已转染 控，通过 RT—PCR方法研究 E，在该细胞系中对 HPV16／E6E7基因的正常宫颈上皮永生化细胞，由 HPV16／E6E7基因及 ER口表达的调控，探讨 E2及 美国哈佛大学保存l2]，经本实验室免疫组化及 RT ERB与HPV在宫颈病变中的作用机制，为宫颈癌