非同位素PCR及Southern印迹杂交分析检测脆性X综合征FMR-1基因突变.pdfVIP

维普资讯 · 16 · 中国优生与遗传杂志2005年第 13卷第4期 非同位素PCR及Southern印迹杂交分析 检测脆性x综合征FMR一1基因突变 ‘ 李 红．肖丽娟，韩 冰 (苏州大学附属第一医院妇产科．215006) 摘 要： 目的 建立一种非同位素的检测脆性X综合征智力缺陷基因(FMR一1)突变的方法。方法 采用PCR技术 结合Southern印迹杂交技术对FMR一1基因进行分析。进而确定其突变类型。结果 共对 190例样本进行了检测。其中2例 为女性前突变携带者，1例为女性全突变患者。结论 非同位素PCR方法可以简便、安全、可靠地检测 FMR一1基 因中 (CGG)n重复拷贝数，可作为临床上对脆性x综合征的筛查的首选方法；而非同位素Southem 印迹杂交可对结果不确定者进 一 步进行检测。 关键词： 脆性x综合征；FMR一1基图；非同位素 中图分类号：R349．82 文献标识码：A 文章编号：1006—9534(2005)04—0016—03 FM R 一1genemutation ofthefragileX syndromewereanalyzed bynon—isotopePCR andSouthern blothybridization．LI Hong。XIAOLi—juan．(DepartmentofObstetricsandGynecology，theFirstAffiliatedHospitalofSuzhouUniversity，Jiangsu Suzhou215006，Chian) Abstract：Objcetive：Toestablishamethodofnon—isotopetodetecttheFMR一1genemutationoffragileX syndrome．Meth． ods：ToanalyzetheFMR 一1genebynon—iostopePCR combiningwithnon—iostopeSou[hern blothybridization．Results：190Sam— pies wereanalized ，twopre—mutationandonefull—mutationweredetceted ．Conclusion：Non—isotopePCP isasimple、safe、and stablemethod foranalyzingtheCGG copies ofFMR一1gene．whichcanbeusedtoscreenthefragileX snydromeatfirstandnon— isotopeSouthernblothybridizationcanbeusedtoconfirm thegenemutationthenafter． Keywords：FragileX syndrome；FM R一1gene；Non—isotope 脆性x综合征是导致家族性智力低下的常见原因。为x 方法提取DNA。 连锁不完全显性遗传病。在人群中男性的发病率约为 1／ 2．PCR方法扩增(CGG)n的重复序列及产物分析：PCR 1225。女性的发病率约为 1／2000[II，弱智者中本病 占6％～ 引物序列选 自FMR一1基因5端 (CGG)n的重复序列两 】0％．其发病率仅次于DownS。脆性x综合征基因于 1991 坝95【l，弓l物 1：5一GACGGAGCR3GCCGCTGCCAGG一3，弓 年被克隆 2【】，并命名为脆性x智能低下一1号基因(FMR一 物 2：5一GTa跚 GCGGCK3GCTCGAGG一3。PCR反应 1)。研究发现FMR一1基因5端(CGG)n的重复序列异常 成分；总体积 10 ，1XPCR扩增缓冲液，0．75mmol／LMg— 扩增是使FMR一1基因转录受影响，FMRP(该蛋 白质主要 ch，200mmol／LdNTP(其 中 dGTP 由7一deaza—dGTP代 在大脑和睾丸组织中表达)减少，导致发病的主要原因3【J。 替)，1