预混合自组装辣根过氧化物酶生物活性膜及其催化活性研究.pdfVIP

维普资讯 第 2期 高 分 子 学 报 No．2 2005年 4月 ACTA POLYMERICA SINICA Apr．，2005 预混合 自组装辣根过氧化物酶生物活性膜及其催化活性研究 江秀明 陈志春 杨绍明 林贤福 (浙江大学化学系 杭州 310027) (河南工业大学化学化工系 郑州 450052) 摘 要 以阳离子化的辣根过氧化物酶 (HRP)和 阴离子聚苯 乙烯磺酸钠(PSs)的预混合溶液 ，与阳离子聚 电 解质聚二 甲基二烯丙基氯化铵 (PDDA)通过逐层组装 ，在 阴离子化聚对苯二酸乙二酯(PET)表面构建 了多层生 物活性膜 ．用紫外．可见光谱仪 (uV．Vis)和原子力显微镜 (AFM)研究了交替 白组装膜 的结构和表面形膜 ，并测 定了自组装膜的生物催化活性 ．结果表明，预混合溶液 中的PSS与 HRP一起沉积在 PDDA膜层上组装成 (PSS +HRP)膜层 ，且每层中PSS和 HRP的比例一致 ；(PSS+HRP)膜层呈条状分布 ，膜表面较为平整 ；多层膜 中的 HRP催化 HO 与4．氨基安替 比林的显色反应的表观米氏常数为9．7×10～mol·LI1(相对于HO 底物)，较溶 液 中(1．52×10一mol·L )的小 ． 关键词 逐层 白组装 ，辣根过氧化物酶，聚电解质 ，原子力显微镜 ，紫外一可见光谱 生物活性膜 的制备及性能研究是生物传感 性等进行了全面研究 ． 器 、生物反应器、生物医学材料等生物功能元器件 的基础 ．在各类制膜技术中，分子 自组装法…以其 1 实验部分 制得 的膜高度有序、膜性能可控、操作简单 、实用 1．1 试剂和仪器 等优点，而被应用于构建包括生物活性膜在内的 辣根过氧化物酶 (HRP)，250U ·mg一，等 电点 各类超薄膜 ，其 中将生物大分子或有机小分 pI=7．2，华美生物技术公司；聚苯 乙烯磺酸钠 子与聚电解质预混合 ，然后再与带相反电荷 的另 (PSS)，M =7．0x10，Acros，聚二 甲基二烯丙基 聚电解质进行交替 自组装的方法称预混合 自组 氯化铵 (PDDA)，20wt％水溶液 ，M =1．0x10 ～ 装 ．Kunitake等在研究酶 的自组装时，首先提 出了 2．0×10，Aldrich；4．氨基安替 比林 (4．AAP)，华东 预混合 自组装概念 ，并用石英 晶体微天平对葡 师范大学化工 厂；聚对 苯二 甲酸 乙二酯 薄膜 萄糖氧化酶的预混合 自组装进行 了研究 ，结果显 (PET)，杭州大 自然磁带厂；石英 圆片，其它试剂 示预混合 自组装能够提 高膜 中生物酶 的表观活 均为分析纯 ，所用水为二次蒸馏水 ． 性；Caruso和 Schuler在研究聚苯 乙烯磺酸钠胶体 NanascopymA型原子力显微镜 (AFM)，Digital 颗粒表面 GOD和 POD与聚电解质的交替逐层 自 InstrumentInc；TU．1800PC紫外可见分光光度计 ， 组装时，也对预混合 自组装进行了研究 ；Das和 北京普析通用仪器有限责任公司；微量黑体石英 Pal则将预混合 自组装应用于小分子有机化合物， 比色皿 ，光程 1cm，