本标准是在我国建立的琼脂扩散试验(AGP)的基础上，并参照美国.pdfVIP

GB/T17999.4-1999 前 言 本标准是在我国建立的琼脂扩散试验(AGP)的基础上，并参照美国SPAFAS公司AGP操作规程 编制而成。 SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检 测方法。本标准为 S《PF鸡 琼脂扩散试验》。 SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分: GB/T17999.1-1999SPF鸡 红细胞凝集抑制试验; GB/T17999.2-1999 SPF鸡 血清中和试验; GB/T17999.3-1999SPF鸡 血清平板凝集试验; GB/T17999.5-1999SPF鸡 酶联免疫吸附试验; GB/T17999.6--1999SPF鸡 胚敏感试验; GB/T17999.7-1999SPF鸡 鸡白痢沙门氏菌检验; GB/T17999.8-1999SPF鸡 试管凝集试验; GB/T17999.9-1999SPF鸡 间接免疫荧光试验。 本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。 本标准由农业部畜牧兽医司归口。 本标准起草单位:农业部实验动物研究中心、山东省农科院家禽研究所。 本标准主要起草人:赵立红、陈德威、张秀美、靳彦华、秦卓明。 中华人 民共和 国国家标准 GB/T 17999.4一1999 SPF鸡 琼脂扩散试验 SPFchicken--Agargelprecipitationtest 范围 本标准规定了琼脂扩散试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。 本标准适用于SPF鸡感染以下病毒后的沉淀抗体的监测:禽流感病毒A型(AvianInfluezaVirus TypeA)、传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus)、传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursal DiseaseVirus)、传染性喉气管炎病毒(InfectiousLaryngotracheitisVirus),禽痘病毒(FowlPox Virus)、马立克氏病病毒(MareksDiseaseVirus)、禽脑脊髓炎病毒(AvianEncephalomyelitisVirus), 网状内皮增生症病毒(ReticuloendotheliosisVirus)、禽呼肠孤病毒(病毒性关节炎)(AvianReovirus), 禽腺病毒I群(AvianAdenovirusGroupI)、多杀性巴氏杆菌(Paste-11amultocida) 2 原理 琼脂扩散试验是一种沉淀反应 伉原、抗体在含有电解质的琼脂凝胶中，可以向四周自由扩散，二者 互相结合，在最适比例处出现沉淀线。常采用已知抗原检测相应的沉淀抗体. 3 试剂和材料 3.1 试剂 3.1.1 琼扩抗原。 31.2 阳性血清。 3.1.3 被检血清。 3.1.4 0.01M,pH7.2,8%氯化钠磷酸缓冲液。 3.1.5 优质琼脂粉或琼脂糖。 3.2 材料 I2门 琼扩板。 3.2.2 打孔器 12.3 移液器。 4 操作程序 4.1琼脂板制备 1g优质琼脂粉或0.8g一Ig琼脂糖加人100ml,O.0lM,pH7.2,8%氯化钠磷酸缓冲液中(检测禽 流感病毒感染时，同0.O1mol/L,pH6.4的800氯化钠磷酸缓冲液配制琼脂)，水浴加热融化，稍凉((60C -65C)，倒入琼扩板内(厚度为3mm)，待琼脂凝固后，4℃冰箱保存备用。 4.2 打孔 用六角形打孔器在琼脂板上按7孔梅花图案打孔，孔径3mm-4mm，孔距3mm 用8“针头挑出 国家质量技术监瞥局1999一11一10批准 2000一04一01实施 GB/T 17999.4-1999 孔内琼脂，挑出时从孔一侧边缘插入针头，轻轻移动，等空气进入孔底后，再向上挑出。 4.3 封底 打孔完毕，封闭孔底 将板底部在酒精灯上烘烤，使底部琼脂微溶化即可，也可在琼脂孔底部与板接 触处加少量溶化的100琼脂或琼脂糖。 4.4 加样