金鱼尾鳍组织的体外培养及血清对其生长的影响.pdfVIP

第1 卷 第3 期 过 程 工 程 学 报 Vol.1 No.3 2001 年 7 月 The Chinese Journal of Process Engineering July 2001 金鱼尾鳍组织的体外培养及血清对其生长的影响 贺丽君， 戚艺华， 聂峰光 （中国科学院化工冶金研究所生化工程国家重点实验室，北京 100080 ） o 摘 要：采用组织块培养法对金鱼不同组织进行培养, 并研究了血清对细胞生长的影响. 在 26 C 温度下，采用添加 15% 胎牛血清的 199 培养基成功地获得了金鱼尾鳍细胞系. 以2×105 个/ml 的 细胞密度接种时，细胞倍增时间为3.3 d, 金鱼尾鳍细胞培养系统中的最适血清浓度为15%. 关键词：金鱼；细胞培养；血清 中图分类号：Q813.1+2 文献标识码：A 文章编号：1009− 606X(2001)03−0328−03 1 前 言 我国鱼类组织培养的研究始于70 年代初期. 目前见诸文献报道的鱼类细胞系包括ZC−7901 ， CIK ，HGC−87，HCC−87，TQ−8801，FG ，SPS，SPH[1−5]. 这些细胞系为鱼类病毒学、免疫学、 细胞学等方面的研究提供了良好的实验材料. 金鱼(Carassius auratus)是最著名的观赏鱼类，有极高的经济价值. 它还是从事生物变异、遗 传进化、胚胎发育和环境保护等研究的优良实验材料. 目前，国内有关金鱼细胞体外培养的研究 尚未见报道. 对金鱼细胞进行体外培养不仅可用于相应病毒的增殖和诊断，而且还可为细胞骨架、细胞系 统发生和发育学等方面的分子水平和细胞水平研究[6−8]提供实验材料. 本工作对金鱼组织进行了体 外培养，并以所获得的金鱼细胞为材料研究了不同血清浓度下细胞的生长情况. 2 材料和方法 一龄金鱼红龙睛由中国科学院发育研究所提供. 采用组织块培养法，将剪碎的组织接种于 6 孔细胞培养板(Costar) ，置于26oC 恒温培养箱中 进行静置培养. 原代培养和传代培养均采用添加 15%胎牛血清(FBS, 天津川页生化制品有限公司) 的199 培养基(Gibco). 待细胞形成单层后，用胰蛋白酶消化，进行传代培养. 在上述培养条件下，采用血球计数板进行细胞计数. 根据每日计数结果，以培养时间为横坐 标，以细胞密度为纵坐标，绘制第10 代细胞的生长曲线. 以血清浓度分别为20%, 15%, 10%, 0 的4 种培养液培养第13 代细胞，绘制不同血清浓度下细 胞的生长曲线. 3 结果与讨论 3.1 不同组织的培养结果 表皮、口、背、尾、肝、肾等组织在培养过程中均有细胞迁出，但尾鳍细胞生长状态良好， 最先形成单层. 对尾鳍细胞进行传代，接种量为2×105 个/ml 时，大约4∼5 d 便可传代1 次. 收稿日期：2000−06−05 ， 修回日期：2000−07−25 作者简介：贺丽君(1972−) ，女，四川省射洪县人，硕士，生化工程专业. 3 期 贺丽君等：金鱼尾鳍组织的体外培养及血清对其生长的影响 329 3.2 尾鳍细胞系的形态特征 细胞为贴壁细胞. 细胞类型以成纤维样细胞为主， 呈梭形，也有部分呈鳞形. 在传代过程中，鳞形细胞逐 渐被梭形细胞取代, 细胞具单核(图1). 3.3 细胞的生长速度 在细胞传至第 10 代时，以2×105 个/ml 的细胞密 度接种，测得第 10 代时的生长曲线(图2). 从图可以看出, 所培养的金鱼尾鳍细胞在前 4