【金版新学案】最新2015届高考生物一轮详细复习 基 因 工 程（考点透析+典例跟踪详解+实验导航大题专训）课件 新人教版.pptVIP

* * 基 因 工 程 基因工程的工具 1．与DNA分子相关的酶。 (1)几种酶的比较： 形成重组DNA分子 磷酸二酯键 DNA分子片段 DNA连接酶 形成黏性末端或平末端 磷酸二酯键 DNA分子 限制酶 作用结果 作用部位 作用底物 项目 种类 形成单链DNA分子 碱基对间的 氢键　　　 DNA分子 DNA解旋酶 形成脱氧核苷酸 磷酸二酯键 DNA分子 DNA(水解)酶 形成新的DNA分子 磷酸二酯键 脱氧核苷酸 DNA聚合酶 (2)限制酶与DNA连接酶的关系： ①限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 ②DNA连接酶起作用时不需要模板。 2．载体。 (1)作用： ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 (2)具备的条件： ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。 ②有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。 ③具有特殊的标记基因，以便进行筛选。 (3)种类： ①质粒：一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，能够自我复制的很小的双链环状DNA分子。 ②λ噬菌体的衍生物。 ③动植物病毒。 ?特别提醒： 巧辨基因工程操作工具的8个易错点 (1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。 (2)限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活。 (3)在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。 (4)将一个基因从DNA分子上切割下来，需要切两处，同时产生4个黏性末端。 (5)不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同一个DNA分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端一般不相同。 (6)限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便于进行检测。 (7)基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同。基因工程中的载体是DNA分子，能将目的基因导入受体细胞内；膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透性有关。 (8)基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。 【例1】　下图表示一项重要的生物技术，对图中物质a、b、c、d的描述中，正确的是(　　) A．a的基本骨架是磷酸和核糖交替连接而成的结构 B．要获得相同的黏性末端，一般用相同的b去切割a和d C．c连接双链间的氢键，使黏性末端处碱基互补配对 D．若要获得未知序列的d，可到基因库中去寻找 解析：a是载体质粒，b限制酶切割质粒，c是DNA连接酶连接质粒和目的基因，d是目的基因。质粒是环状DNA，其基本骨架是磷酸和脱氧核糖交替连接而成的。要想获得同一种黏性末端一般用同一种限制酶。DNA连接酶连接的是磷酸和脱氧核糖之间的键，不是氢键。对于未知序列的目的基因是无法从基因文库中获取的。 答案：B 跟踪训练 下图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次是(　　) A．DNA连接酶、限制性内切酶、解旋酶 B．限制性内切酶、解旋酶、DNA连接酶 C．解旋酶、限制性内切酶、DNA连接酶 D．限制性内切酶、DNA连接酶、解旋酶 解析：使氢键断裂的是解旋酶；限制性内切酶将相邻两个核苷酸的磷酸二酯键断开；连接DNA片段间磷酸二酯键的是DNA连接酶。 答案：C 基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取。 (1)直接分离：从自然界已有的物种中分离，如从基因文库中获取。 (2)人工合成目的基因的常用方法： ①已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板。 ②以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成。 (3)PCR技术与DNA复制的比较： 条件 原料 原理 模板、酶等 四种游离的脱氧核苷酸 DNA双链复制(碱基互补配对) 相 同 点 DNA复制 PCR技术 比较项目 结果 酶 场所 解旋 方式 形成整个DNA分子 在短时间内形成大量的DNA片段 细胞内含有的DNA聚合酶 热稳定的DNA聚合酶(Taq酶) 主要在细胞核内 体外复制 解旋酶催化 DNA在高温下变性解旋 不 同点 2.基因表达载体的构建。 (1)基因表达载体的组成：启动子、目的基因、终止子以及标记基因等。 (2)基因表达载体的构建方法： 3．将目的基因导入受体细胞。 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 将目的基因插入到Ti质粒的T—DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 转化过程 原核细胞 受精卵 体细胞 受体细胞 感受态细胞法 显微注射技术 农杆菌转化法 常用方法 微生物细胞 动物细胞 植物细胞 生物种类 4.目的基因的检测与鉴定。 翻译 检测