NY_T 2011—2011 柑橘类水果及制品中柠碱含量的测定.docVIP

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2011—2011 柑橘类水果及制品中柠碱含量的测定 Determination of limonin in citrus fruits and derived products 2011-09-01 发布 2011-12-01实施前 言 本标准按照GB／T 1.12009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。 本标准由全国果品标准化技术委员会(SAC／TC 501)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院柑橘研究所、农业部柑橘及苗木质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：焦必宁、赵其阳、王成秋、苏学素、付陈梅。柑橘类水果及制品中柠碱含量的测定 1 范围 本标准规定了柑橘类水果及其制品中柠碱含量的液相色谱测定方法。 本标准适用于柑橘类水果及其制品中柠碱含量的测定。 本标准定量测定范围：1 mg／L～200 mg／L。 本标准定量限：0.7 mg／kg。 本标准检出限：0.2 mg／kg。 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB／T 6682分析实验室用水规格和试验方法 试料中的柠碱用有机溶剂提取经浓缩、定容、离心、微滤膜过滤后高效液相色谱法测定，外标法定量。 除非另有说明，在分析中仅使用确认为色谱纯的试剂和GB／T 6682规定的一级水。 二氯甲烷（CH2Cl2，CAS号1975 - 09 - 2）。 甲醇(CH3H，CAS号6756 -1)。 乙腈(CH3CN，CAS号1975 - 058)。 柠碱标准品(C26 H38，CAS号1180 - 71- 8，纯度大于990%)。 柠碱标准储备溶液：称取5.0 mg (精确到0.1 mg)的柠碱品(4.4)，用甲醇(4.2) 溶解定容至 10 m，配制成质量浓度为50 mg／mL标准储备溶液，于-20℃冰箱内贮存。 高效液相色谱仪：配有紫外检测器(UV)。 分析天平：感量为001 g和0.000 1g。 离心机：转速不低于10 000 r／min。 组织捣碎机。 旋转蒸发仪。 超声波清洗器。 离心管：1.5 mL。 滤膜：045 μm，有机相。 6.1.1 果实样品，取可食部分按四分法缩分后将其切碎，放入组织捣碎机中匀浆后取样。 6.1.2果酱、果汁及饮料样品，充分混匀后直接取样。 6.1.3罐头样品，按四分法进行缩分后，放组织捣碎机中匀浆后取样。 6.1.4果脯蜜饯类，按四分法进行缩分后，将其切碎充分混匀后取样。 6.2提取净化 平行称取两份试料每份试料10 g（精确到0.01 g）于50 mL烧杯中加10 mL二氯甲烷(4.1)，超声萃取10 min分液有机相转入50 mL蒸馏瓶中残渣再加10 mL二氯甲烷 (4.1)，超声萃取10 min合 并有机相于蒸馏瓶中，40℃下减压蒸馏至近干，用100 mL甲醇 (4.2)溶解，转入1.5 mL的离心管中， 离心，上清液过滤膜(5.8)，得到待测液。 6.3仪器参考条件 色谱柱：C18色谱柱(粒度5μm，4.6 mm250 mm)或同等性能的色谱柱。 柱温：30℃。 进样量：10 μ。 检测波长：210 nm。 流动相：见表l。 表1 流动相梯度洗脱程序 时间 m流速 mL／min A相（水） % B相（乙腈） % 1.00 65 35 16 165 35 17 1.00 30 70 25 1.00 30 70 26 1.00 65 35 35 1.00 65 35 6.4 标准工作曲线 取柠碱标准储备溶液(4.5)用甲醇逐级稀释，得到质量浓度分别为1.0 mg／L、5.0 mg／L、10 mg／L、 25 mg／L、50 mg／L、100 mg／和200 mg／L的标准作溶液按6.3进行测定(色谱图参见附录A)。以柠碱质量浓度为横坐标，相应的积分峰面积为纵坐标，计算标准曲线或求线性回归方程。 做两份试料的平行测定。取10 μL试样溶液和相应的标准工作溶液顺序进样，以保留时间定性，以 色谱峰面积积分值定量，试样溶液中柠碱响应值均应在定量测定范围之内。 除不加试样外，均按上述步骤进行操作。 试样中柠碱的含量以质量分数计，数值以毫克每千克(mg／kg)计，按式(1)计算： ………………………………………………(1) 式中： ρ——样液中柠碱测定质量浓