孙殿兴2007年河北省肝病会议讲座稿.pptVIP

抗乙肝病毒临床前实验研究 白求恩国际和平医院肝病科 孙殿兴 前 言 核苷类似物：多种核苷类似物陆续上市，疗效非常显著，随着临床上可选择的药物越来越多，耐药问题也正在逐步得到解决。但由于目前该类药物只能抑制病毒复制，长期服用该类药物的效果还在进一步研究之中。 干扰素：理论上，干扰素具有很强的抗病毒活性，但是在临床应用中效果还不够理想。 cccDNA：此外，目前各种药物对cccDNA的清除均无良好的效果，难于彻底清除病毒。 研究抗HBV新策略具有重要意义。本报告仅对处于实验研究阶段的抗HBV新策略的机理作一简要介绍（干扰素和核苷类似物除外）。 HBV解剖及基因表达图 HBV复制周期 抗乙肝病毒治疗策略 随着对HBV分子生物学认识的不断深入，许多策略可用于抗HBV治疗： 阻断病毒与肝细胞结合 抑制病毒逆转录酶的活性： 核苷（酸）类似物； 抑制病毒读码框架的表达：反义寡核苷酸、反义RNA、核酶、 RNA干扰、APOBEC3酶家族等； 抑制病毒包装：显性阴性突变体、异芳香双氢嘧啶 (HAP)、AT130，AT61等； 免疫调节治疗 ：干扰素、治疗性乙肝疫苗、核酸疫苗、树突细胞（DC)疫苗、CIK细胞等。 阻断病毒与肝细胞结合 病毒进入肝细胞前必须与肝细胞膜的特殊受体结合，已报道至少有10种分子和肝细胞的受体有关，如免疫球蛋白受体、IL-6受体、转铁蛋白受体及去唾液酸糖蛋白受体等。阻断病毒与肝细胞结合或许将成为新的治疗途经之一，但目前这方面尚缺乏新的进展。 反义寡核苷酸 合成的、短的、单链DNA，经过修饰的后增加稳定性，序列可与靶RNA或靶DNA互补。 反义RNA 指与mRNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA，所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合, 即抑制了该mRNA的翻译。可用质粒表达 。 核 酶 核酶（ribozyme）指具有催化功能的RNA，可以识别底物RNA的特定序列，并在专一性位点上切割、裂解靶RNA，抑制基因表达 。可在质粒上表达。 显性阴性突变体（Dominant negative mutants） 细胞内单链抗体 基本原理：首先从杂交瘤细胞、外周血淋巴细胞中提纯mRNA，再经RT-PCR分别扩增抗体的重链可变区和轻链可变区编码基因，人工合成一条寡核苷酸序列（称为Linker），将VL的C端与VL的N端或VH的C端与VL的N端相连接，构建成单链抗体基因，在一定的表达系统中得以表达。 APOBEC 酶家族 APOBEC 基因家族成员包括 APOBEC1 、 APOBEC2 、 APOBEC3A-G 以及 AID （活化诱导脱氨酶）等。 HIV研究过程中的新发现，使病毒产生致死的G→A高突变。 抗HBV研究：APOBEC3B、C、F、G；也发现干扰素能诱导其表达上调，或许解释了干扰素抗病毒作用的根本机理； 已有多篇文献将其用于抗-HBV基因治疗的研究。 RNA干扰 美科学家因RNAi获2006诺贝尔医学奖 两种HBV载体 异芳香双氢嘧啶 (HAP) 德国学者Goldmann等用350000种化合物在2.2.15细胞筛选，得到十余种具有明显抗HBV作用的化合物，最终确定了用出Bay 41-4109作深入研究。 属于非核苷类药物； 主要作用：抑制病毒核心颗粒正确的组装； 还需要进一步的临床试验来证明它的效果。 治疗性乙肝疫苗 血源疫苗或重组HBsAg疫苗 加猪苓多糖？ 含pre-S,和S抗原的疫苗 免疫复合物性(IC)疫苗 复旦大学闻玉梅院士 多肽疫苗 第三军医大学吴玉章教授 核酸疫苗 质粒肌肉注射 细胞疗法 树突细胞（DC)疫苗：体外病毒抗原冲击致敏DC，再回输体内，诱导病毒抗原特异性CTL 病毒抗原肽直接冲击；灭活的病毒疫苗共同温育；阳离子脂质体携带病毒蛋白质；病毒载体在DC细胞内表达抗原。 LAK细胞：淋巴因子激活的杀伤细胞 PBMC在IL—2存在时培养。 CIK细胞：多种细胞因子诱导的杀伤细胞 PBMC用IFN-γ、Anti-CD3、IL-2刺激。 CHAK细胞：趋化因子活化的杀伤细胞 PBMC用趋化因子活化，如：RANTES、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1和TCA3等。 小结与展望 随着对HBV分子生物学认识的不断深入，新的疗法层出不穷；相当一部分仍处于细胞水平和动物实验阶段，在应用于临床之前，尚有许多问题有待进一步研究。 基因治疗的载体系统仍是一个有待解决问题； HBV细胞感染模型及适宜的小动物模型的缺乏，阻碍了HBV分子生物学的研究，也给新疗法的验证带来了学多困难。 有望2年内攻克癌症？ * 概念：用突变蛋白抑制同种正常蛋白的功能。