甲醇浓度对毕赤酵母表达重组人复合α干扰素分离纯化得率的影响.pdfVIP

生物 工程 学 报 ChinJBiotech2011，December25；27(12)：1789—1796 journals．im．ac．cn ChineseJournalofBiotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im．ac．cn @2011CJB，Allrightsreserved． 甲醇浓度对毕赤酵母表达重组人复合 干扰素分离 纯化得率的影响 吴丹1v储炬2王永红2庄英萍2张嗣良 1江南大学食品科学与技术国家重点实验室，无锡 214122 2华东理工大学生物反应器国家重点实验室，上海 200237 摘 要：研究了毕赤酵母Pichiapastoris表达的重组人复合 a干扰素 (cIFN)时不同诱导甲醇浓度对 cIFN 分离纯化得 率的影响，并分析 了原因。在 5L罐中采用 0．25、0．50和 0．75％ (W／V)三个甲醇浓度诱导时，在 0．75％高甲醇浓度诱 导下clFN表达水平最高，达到 2．06 L，是 O．25％低甲醇浓度诱导的 1．24倍 ，但是低甲醇浓度诱导下clFN分离纯化 得率却高于高甲醇诱导浓度下 3．75倍 。另外，低 甲醇浓度下发酵上清液clFN抗病毒活性为2．85×100IU／mL，较高甲醇 浓度提高了4．48倍。进一步采用 SDS．PAGE和Native．PAGE免疫印迹分析不同条件下发酵液中clFN存在状态，发现 在高甲醇浓度下 clFN容易形成大量的聚合体，分别为共价聚合和非共价聚合，而clFN单体含量较少，但是低 甲醇浓 度诱导下情况完全相反。最终在 0．25％甲醇诱导下分离纯化 1L发酵上清液可得 O．73g单体 clFN，是 0．75％甲醇诱导 下 的 3．84倍 。 关键词：毕赤酵母 ，复合 0【干扰素，甲醇浓度 ，聚合体 Influenceofmethanolconcentrationonpurificationrecovery ofconsensusinterferon—I】【producedbyPichiapastoris DanWu ，JuChu2YonghongWang，YingpingZhuang，andSiliangZhang ， 1StateKeyLaboratoryofFoodScienceandTechnology，JiangnanUniversity，Wuxi214122，China 2StateKeyLaboratoryofBioreactorEngineering，EastChinaUniversityofScienceandTechnoloyg，Shanghai200237，China Abstract： Weobservedthe influenceofmethanolconcentration onpurificationrecovery ofrecombinnathumanconsensus interferon-c【(cIFN)producedbyPichiapastor．FermentationscontrolledatO．75％(W／ methnaolshoweda24％increaseincIFN expressioncomparedtousing0．25％ methnao1．However,thepurificationrecovery rateofclFN atO．25％ mehtna olwas3．75-fold higherhtanhtatat0．75％methano1．Toseekhtereason，wenaalyzedhtesatbilityofclFNbySDSnadNativeaswellas Westernblotting．TheelectrophoresisresultsrevealedthatclFN formeda lotofaggregatesinmediawhentheinductionwas Received：October10，2011；Accepted：December7，2011 SuppoSedby：NationalBasicResearchProgramofChina(973Program)(No．2007CB714306)，NationalSpecialFundforSta