经犬心房外膜涂布实现外源基因在心房肌（细胞）的高效转染.pdfVIP

ISSN 1007—7626 中国生物化学与分子生物学报 http：／／cjbmb．bjmu．edu．cn 2011年 12月 CN 11—3870／Q ChineseJournalofBiochemistryandMolecularBiology 27(12)：1167～l173 · 技术与方法 · 经犬心房外膜涂布实现外源基因在心房肌 (细胞)的高效转染 崔 坤，范晋奇，考国营，凌智瑜，殷跃辉，苏 立 (重庆医科大学附属第二医院心 内科 ，重庆 400010) 摘要 心房肌高效的基 因转染是一项技术难题．心房血供少、心房壁薄等原 因限制 了心房肌基因转 染方法的发展．但心肌基 因治疗作为一种研究和治疗心脏疾病的有效方法而逐渐被学者重视．本研 究探讨一种经心房外膜涂抹使携带有绿色荧光蛋 白(EGFP)基因的腺病毒高效靶向转染心房肌细 胞方法的可行性．经犬胸骨正 中开胸术，将含有一定浓度携带 EGFP基 因的腺病毒、胰蛋 白酶和 poloxamerF407的混合溶液涂抹至右心房外膜．术后经荧光显微镜观察荧光强度和 实时 PCR检测 EGFPmRNA表达水平．EGFP荧光强度和 mRNA表达水平在第 1～6周呈现先增高后减低的趋势， 其高峰在第3周出现；第3周右心房前壁各层心肌细胞均有EGFP表达；右心耳 EGFPmRNA表达 水平高于右心房前壁，右心房前壁和后壁表达水平无明显差异；房 间隔的表达水平低于右心房，但 明显高于左心房；心室和其它脏器如肺脏、肝脏、脾脏、骨骼肌、胃壁及 小肠壁等 的表达水平远低于 右心房 ；通过 HE染色及 Masson’s染色，第3周心肌无明显炎症反应和纤维化改变．因此，经心房外 膜涂抹 的方法使基 因靶向转染心肌细胞具有较好的高效性、靶向性和安全性． 关键词 心房 ；基 因转染 ；高效性 ；靶 向性 ；安全性 中图分类号 Q3 A M ethod forHighlyEffectiveGeneTransfer intoAtrialM yocardium by “Painting’’onAtrialEpicardialin Canine CUIKun，FANJin-Qi，KAOGuo-Ying，LINGZhi—Yu，YINYue—Hui，SULi (DepartmentofCardiology，SecondAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400010，China) Abstract Gene transfer in atria myocardium with high efficiency hasbeen technically challenging． Developingnew methodsforatrialgenetransfercanbedifficultinmanyaspects，suchastheshortageof bloodsupply and the thinnessofatrialwal1．However，myocardialgenetherapy remained to be an importantapproachfortheinvestigationandtreatmentofcardiacdisease．W eexploredthefeasibilityof casting mixture solution on the atrial epicardialto improve the efficiency and targeting in canine myocardialgenetransfer．ThemixturesolutioncontainedrAd—EGFP(1×10pfu／mL)，trypsin(0．5％) andpoloxamerF407 (35％)andwasspreadontherightatrialepicardialviamediansternotomy．The fluorescenceintensi