脂质超声微泡增强AAV介导的致密结构细胞的基因转导.pdfVIP

泸州医学院学报 2013年 第 36卷 第 1期 JournalofLuzhouMedicalCollege Vo1．36 No．1 2013 1 论著 脂质超声微泡增强AAV介导的致密 结构细胞的基因转导木 刘 中兵，钟志容 ，傅秀娟 ，李劲薇 ，兰欢 ，余昕 ，何颖 ，左正云 (泸州医学院：现代教育技术中心；药学院：心血管医学研究所 ，四川I泸州 646000) 摘 要 目的：探讨超声介导的脂质微泡能否增强腺相关病毒 (AAv)对具有致密结构的细胞的转导效率。方法：制备载 AAV—eGFP的脂质超声微泡，以Malvern粒度检测仪检测微泡粒径及分布 ，选用人支气管上皮细胞 16HBE14o一为模型细胞 ，采 用Transwell小室细胞培养技术培养具有紧密结构的人支气管上皮细胞 16HBE140一，利用倒置荧光显微镜定性观察转导效率， 采用流式细胞技术进一步定量检测转导效率。结果：本试验制备的载AAv脂质超声微泡呈圆球形均匀分布，平均粒径为 2．46± 1．2 m；脂质微泡携 同超声处理能显著增强AAv对形成致密结构的人支气管上皮细胞 16HBE140一转导效率 。结论 ：超声介导 脂质微泡为 AAv在基 因治疗 中的应用提供 了一种新 的途径 ，为从 v在体 内的靶 向应用奠定了基础 。 关键词 脂质超声微泡；腺相关病毒 ；基 因转导；人支气管上皮细胞 中图分类号 Q54 文献标识码 A 文章编号 1000—2669(2013)1—0001—05 LipidultrasoundmicrobubbleaugmentatedAAV-mediatedgenetransduction incellswithtightjunction LiuZhongbing，ZhongZhirong，FuXi~uan，LiJingwei，LanHuan2,YuXin，HeYing，ZuoZhengyun ModernEducationTechnolgyCenter；ZDepartmentofPharmacy；2InstituteofCardiovasology, LuzhouMedicalCollege AbstractObjective：Totestwhetherthelipidmicrobubbleexposedtoultrasoundcouldenhancetheadeno-— associatedvirus (AAV)mediatedgenetransductionincellswithtightjunction．Methods：TheAAV-loadedlipid ultrasound microbubblewasprepared bythebath-ultrasoundmethodand theparticlesizeordistributionwas measuredbyMalvernSizerNanoZS90．Thehumanbronchialepithelialcellsof16HBE14o-wereselectedasthe modelcells，whichwereculturedintheTranswellinserttoformthetightjunctionbetweencellsof16HBE14o-． Afteradministration，thetransducted cellswereobservedforpositivecellswith expressionofgreenfluorescence protein．Further，thetransductionefficiencywasestimatedbytheflow cytometricanalysis．Results：TheAAV— loadedlipidultrasoundmicrobubblepreparedin